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大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書
點擊次數(shù)：10 發(fā)布日期：2019-3-22
來源：本站 僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)
使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠
1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用 途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）測定。
工作原理：
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）水平。向預(yù)先包被了大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3），溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成
從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法：
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標(biāo)本要求：
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序：
根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。 加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗1,25-(OH)2D3抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；3）代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗1,25-(OH)2D3抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50 l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50 l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。 操作程序總結(jié)：
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
檢測范圍：
檢測范圍：1.0 ng/L -40ng/L
保存條件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6個月(2-8℃)。
使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠
1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用 途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）測定。
工作原理：
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）水平。向預(yù)先包被了大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3），溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成
從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法：
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標(biāo)本要求：
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序：
根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。 加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗1,25-(OH)2D3抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；3）代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗1,25-(OH)2D3抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50 l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50 l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。 操作程序總結(jié)：
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
檢測范圍：
檢測范圍：1.0 ng/L -40ng/L
保存條件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6個月(2-8℃)。
