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利用相位差顯微鏡觀察

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-03-18  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):208

利用相位差顯微鏡觀察-細(xì)胞存活測定實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞存活、死亡之測定法
一、 相位差顯微鏡(phase-contrastmicroscope)
利用相位差顯微鏡,觀察給藥前后細(xì)胞型態(tài),以了解細(xì)胞經(jīng)藥物處理后
型態(tài)的變化,評估藥物對細(xì)胞狀態(tài)的影響。
二、 細(xì)胞存活率之測定:MTT 還原分析法(3-(4,5-dimethylthianol-2-yl)-2,5
diphenyltetrazolium bromide reduction assay)

一、原理
正常健康的細(xì)胞,其細(xì)胞粒腺體內(nèi)膜的琥珀酸去氫醣(succinate
dehydrogenase)具有將 MTT(黃色)還原為 MTT-formazan(紫色)的能
力。而紫色顏色的深淺程度可代表還原能力的強(qiáng)弱,即琥珀去氫醣的活性,同時也反應(yīng)粒腺體的生理狀況。
由于粒腺體是細(xì)胞內(nèi)對環(huán)境因素最為敏感,因此粒腺體的生理狀況可代表細(xì)胞的生理狀況。當(dāng)還原能力強(qiáng)時,表示克氏循(Kreb’s cycle)環(huán)進(jìn)行速率快,可產(chǎn)生較多的能量供細(xì)胞使用,故可代表細(xì)胞的健康情形
良好

二、試劑
1. 5mg/ml MTT 溶液(溶劑:1X PBS),避光 4℃保存。
2. Dimethyl sulfoxide(DMSO):Sigama

三、
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 每孔留下 350μl 的留胞培養(yǎng)液,加入 35μl MTT 溶液(黃色),避
光并靜置室溫下反應(yīng) 1 小時。
2. 移除含有 MTT 的細(xì)胞培養(yǎng)液,加入 350μl DMSO 以溶解紫色顆粒。
待紫色顆粒完全溶解后,每孔各取 125μl 的紫色溶液置入 96-well
RIA/EIA plate 中,設(shè)定波長為 570 nm(630 nm 當(dāng)作參考波長),測其
吸光值。吸光值越高,表示 MTT-formazan 產(chǎn)量越高,即代表細(xì)胞之
存活率越高。
3. 計(jì)算細(xì)胞細(xì)胞存活率=樣品吸光值 / 控制組吸光值 × 100﹪

 
 
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