日本在熒光顯微鏡下培育出人造精子

將ＧＦＰ小鼠的骨髓細(xì)胞植入到白消安（Busulfan）處理小鼠和c-kit突變小鼠睪丸中。 10-12周后殺鼠觀察植入情況。一側(cè)睪丸取出并將曲細(xì)精管分散后直接在熒光顯微鏡下鏡檢，另一側(cè)固定后行免疫組化染色（Sertoli細(xì)胞用的 marker是FSH-R， Leydig 細(xì)胞用的標(biāo)志物是P450scc, 生殖細(xì)胞用的標(biāo)志物是VASA）。 供體細(xì)胞取自6-8周的GFP小鼠，先PBS洗，34°C 0.05
g/ml 膠原酶+0.025% 胰酶消化， 洗離心等等。注射供體細(xì)胞的玻璃針在頂端磨出一帶斜面的鋒利尖口。先用無菌的30號(hào)注射針頭在輸出管上扎一小口， 再將裝有供體細(xì)胞的玻璃針沿小孔注入約10
l 的細(xì)胞懸液。 在免疫組化染色標(biāo)本中， 使用抗GFP抗體來追蹤哪些細(xì)胞是供體來源的。 結(jié)果：在白消安（Busulfan）處理小鼠， 來源于供體的三種細(xì)胞類型（Sertoli細(xì)胞、Leydig 細(xì)胞和生殖細(xì)胞）均能在移植的睪丸中發(fā)現(xiàn)， 不過來源于供體的、帶ＧＰＦ的生殖細(xì)胞發(fā)育停留在精母細(xì)胞早期而不繼續(xù)發(fā)育。 在c-kit突變小鼠睪丸中， 僅發(fā)現(xiàn)了兩種細(xì)胞類型（Sertoli細(xì)胞、Leydig 細(xì)胞）。外源的干細(xì)胞能在睪丸的微環(huán)境中分化和發(fā)育。

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