研究細(xì)胞的立體結(jié)構(gòu)的試驗方法和步驟-生物顯微鏡常識

幾種常用的離析方法和離析材料永久制片方法

前言：
（用化學(xué)藥品或酶把細(xì)胞間的物質(zhì)溶解，使細(xì)胞分離的方法稱為離析法。
這種方法便于研究細(xì)胞的立體結(jié)構(gòu)。經(jīng)分離的材料，可作臨時觀察，
也可制成永久制片）

生物材料的離析方法

  1.鉻酸---硝酸離析法此法適用于木質(zhì)化組織，如木材、纖
維和硬化細(xì)胞等。離析液是等量10%鉻酸與10%硝酸混合液。方
法是先將材料切成火柴梗粗細(xì)、長約1厘米的小條，放入廣口瓶
中，然后加入離析液，其量約為材料的20倍，置于30一  40 0C溫箱
中直至材料分離為止。此時可用水洗凈材料并保存于70%酒精
中。
  2.鹽酸---草酸按離析法鹽酸一草酸錢離析法較緩和，適用
于葉肉組織、髓和其他薄壁細(xì)胞的離析。其方法是先把材料切成小
塊，放于3，1的70%酒精和蘸薰仁酸混合液中24小時。然后用水

  2.鹽酸一草酸按離析法鹽酸一草酸錢離析法較緩和，適用
于葉肉組織、髓和其他薄壁細(xì)胞的離析。其方法是先把材料切成小
塊，放于3:1的70%酒精和濃鹽酸混合液中24小時。然后用水
洗凈，放入0.5%草酸按水溶液中，時間視材料性質(zhì)而定，每隔1-
2日檢查一次，直至材料分離。離析后用水沖去草酸按，把材料保
存于70%的酒精中備用。

  3.氨水離析法適用于觀察分生組織細(xì)胞的立體形狀。將剛
萌發(fā)種子的胚根沿縱向切成薄片，在濃氨水中浸24小時后水洗。
染色后取少許材料置于載玻片上，蓋上蓋玻片，用解剖針輕敲使細(xì)
胞分離。在光學(xué)顯微鏡下便可觀察到細(xì)胞的立體形狀。

  4.酒精一鹽酸離析法此法可用于幼嫩材料的離析，如根
尖、莖尖和幼葉等。用等量的95%酒精和濃鹽酸混合，在50℃條件
下離析約24小時。如果材料已呈半透明狀態(tài)，表明已離析完全，用
水洗凈鹽酸后即可用70%的酒精保存?zhèn)溆谩?/p>

用離析材料制作永久制片過程

  離析后的材料只需輕輕震動，細(xì)胞彼此即分離開。這些材料可
制成臨時裝片進(jìn)行觀察，也可制成永久制片保存。永久制片的制作
過程因材料和觀察目的不同而異。

下面以裸子植物(松樹)木質(zhì)部離析材料為例，介紹管胞裝片的制作過程。

  1.將離析后的材料充分水洗，以徹底除去離析劑(鉻酸和硝
酸)。為防止材料掉失，可用離心機(jī)收集離析材料(管胞)。
  2.洗凈后的材料用1%的番紅水溶液染色12^24小時。然后
用水洗去殘余染料，并用離心機(jī)收集材料。
  3.脫水仍用離心機(jī)操作。依次用30%,50%.70%.85%.
95%,100%(兩次)的酒精脫水，每次5-10分鐘。
  4.透明分別用酒精二甲苯混合液、純二甲苯(二次)透明，
每級5一10分鐘。
  5.封片取清潔干燥的載玻片和蓋玻片，將透明后的材料少
許放到載玻片上，滴樹膠，加蓋玻片即成。

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