熒光顯微鏡結(jié)構(gòu)特征之照明裝置有哪些類型
熒光顯微鏡檢術(shù)采用的照明系統(tǒng)的主要類型是:透射式暗場、亮
場照明和入射式暗場照明,后者用環(huán)形聚光器,或者通過一個普通的、
適于亮場照明的顯微鏡物鏡作入射照明。
日常的熒光顯微鏡檢術(shù)中,一般用分級暗場照明或通過普通物鏡
作表面照明。
然而,在測微熒光術(shù)中,常常要把上述照明類型結(jié)合起來。
暗場聚光器
在用暗場聚光器的情況下,聚焦在樣品上的激發(fā)光錐不直接進(jìn)入
顯微鏡物鏡,而構(gòu)成中空的光錐,光錐的頂點落在樣品平面內(nèi)。只有
當(dāng)存在顯微鏡樣品時,光線才被折射進(jìn)入物鏡,于是形成暗場像。暗
場聚光器特別適用于熒光顯微鏡檢術(shù),因為熒光顯微鏡的數(shù)值孔徑
(NA)較高。為了得到恒定熒光讀數(shù)所需要的、可多次重復(fù)的照明條
件,必須預(yù)先極小心地讓聚光器聚焦和精確對中
亮場聚光器
亮場聚光器很少用于日常的熒光顯微鏡檢術(shù),因為暗場聚光器產(chǎn)
生的像反差高得多。然而,在測微熒光術(shù)中,根據(jù)樣品吸收透射光的
程度及其熒光象,可以用它來尋找并挑選顯微鏡制品中合適的區(qū)域。
測微熒光術(shù)中,測量前要把物體引進(jìn)測量視野內(nèi)。因為尋找物體
并把它小心地對在測量光闌中心內(nèi)常常很費時間,所以這一步不宜用
強度高的表面光完成,否則FRP 會發(fā)生不希望的、迅速的衰減。由于
若干種FRP 也有吸收像,在用低壓燈為光源,用透射式亮場照明時能
夠觀察到。
在這些情況下,實際上不存在FRP 的衰減。某些雙染技術(shù)中,同
一個顯微鏡樣品上只有一種FRP 能用熒光顯微鏡檢術(shù)發(fā)覺
在這種情況下,同樣的分級亮場聚光器也必須用于熒光顯微鏡檢
術(shù)。如果具有現(xiàn)代高質(zhì)量的短波通干涉型干涉濾波器,用分級亮場聚
光器常常可以得到反差滿意的像
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