相差以及熒光集一體的光學(xué)顯微鏡的應(yīng)用特點(diǎn)

  熒光顯微鏡熒光顯微鏡檢術(shù)中另一種類型的可見(jiàn)光顯微鏡檢
術(shù)，其應(yīng)用率正在迅速增長(zhǎng)。熒光顯微鏡檢術(shù)中，用于照射標(biāo)本
的光線，為某一種波長(zhǎng)的光線。所見(jiàn)到的影像，是一種分子發(fā)射
的結(jié)果，這種分子可吸收初級(jí)激發(fā)光線，然后再以射出波長(zhǎng)較長(zhǎng)、
能量較低的光線。在聚光器下面和物鏡上面各放置適當(dāng)?shù)臑V片，
以保證好象是處于“自身發(fā)光的”狀態(tài)。次級(jí)發(fā)射可來(lái)自標(biāo)本中
天然存在的“熒光物”，或來(lái)自引入、與標(biāo)本的某些特殊成分相
結(jié)合的熒光染料，或者來(lái)自與特異抗體相連結(jié)的熒光染料，由于
熒光影像所固有的高度反差和特異性，因此，熒光顯微鏡技術(shù)是
將來(lái)大有前途和十分重要的一種顯微技術(shù)。

  相差顯微鏡相差顯微鏡是一種很重要的光學(xué)設(shè)計(jì)，它可把肉
眼不能觀察的折射率的微小差異，轉(zhuǎn)換成可以看到的強(qiáng)度差異。

  因此相差顯微鏡可觀察活細(xì)胞的某些成分，而在通常情況下，
這些成分只有在已死的染色標(biāo)本上才能看到（圖1-7 ），光學(xué)顯
微鏡的影像平面內(nèi)，來(lái)自相當(dāng)于帶有志其四周不同折射指數(shù)的標(biāo)
本透明區(qū)域的光線，是處于周圍介質(zhì)光線的相位之外，但是，通
常的光學(xué)顯微鏡對(duì)這些相位差異并不敏感，所以，在這些各部結(jié)
構(gòu)之間不顯示強(qiáng)度差異，因而沒(méi)有反差。相差顯微鏡配備有特殊
光欄、吸收板和相位轉(zhuǎn)換板，這些裝置可用來(lái)：（1 ）部分地區(qū)
分背景照明光線和來(lái)自小的透明標(biāo)本微細(xì)結(jié)構(gòu)的、在寬角上分散
繞射的光線；以及

  （2 ）通過(guò)在影像平面上光線的相互作用這種方式，轉(zhuǎn)換這
兩種光線成分的相位和強(qiáng)度，從而在原先只存在相位差異的部位，
產(chǎn)生強(qiáng)度差異和反差。

  相差顯微鏡的幾個(gè)主要缺點(diǎn)為：（1 ）由于不能完全區(qū)分背
景光線和繞射光線，其影像周圍可出現(xiàn)暈；（2 ）吸是來(lái)自小的
物體或來(lái)自邊緣部分的、快速變換的延遲的相位差異。

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