環(huán)境試樣如海水或飲用水中只有少量的細(xì)菌-計量顯微鏡

  例如，光偏振會導(dǎo)致分子雙折射(molecular birefringence)。長的或平的分
子，尤其是聚合大分子，可以清楚地顯現(xiàn)出分子雙折射，分子雙折射特別適合于
檢測微生物產(chǎn)生的胞外聚合物。在分子雙折射中，當(dāng)偏振光遇到一系列鏈狀排列
的原子偶極，如在長分子中，偶極力引起光沿著鏈的縱向振動，在兩極處產(chǎn)生了
更大的極性各向異性。然而，分子中的側(cè)鏈趨向于減少分子主鏈中的雙折射強
度，使極性各向異性減小。樣品中呈現(xiàn)的各向異性的模式和強度可指示樣品的純
度和元素結(jié)構(gòu)。

  樣品對偏振光效應(yīng)的分辨率依賴于通過偏光器產(chǎn)生平面偏振光以及用檢光器
檢測效果。在偏光顯微鏡中使用兩種偏光器:偏光鏡和檢光鏡。偏光鏡傳遞光，
置于光源與鏡臺下部的聚光透鏡之間;檢光鏡置于物鏡和目鏡之間。許多偏光器
使用偏振膜制造，如位于兩個保護性的薄玻璃片之間的人造偏光板。當(dāng)來自第一
個偏光鏡的偏振光，在允許其通過檢光鏡的方向振動時，顯微鏡的視野將變黑，
因為偏光鏡光振動的方向是交叉的。這樣，在偏光顯微鏡中，對比度
是整個樣品多種干涉現(xiàn)象的結(jié)果。晶體中每一點的光干涉和延遲會產(chǎn)生在黑色背
景中的對比度和顏色。Michel-levy干涉光譜基于光通過不同厚度的樣品的光延
遲，根據(jù)Michel-levy干涉光譜，光干涉可產(chǎn)生一級灰色、高級白色和彩色的樣
品影像。

稀釋步驟
  提取步驟之后，通過樣品的一系列稀釋把微生物分成若干單獨的再生單元。
無菌水、生理鹽水、蛋白陳或磷酸鹽緩沖溶液是稀釋過程中常用的幾種溶劑。盡
管水很方便，也常常被使用，但在稀釋過程中它不是首選溶劑，因為水不能防止
稀釋過程中的滲透壓沖擊(osmotic shock).

水樣的濃縮步驟

  在一些環(huán)境試樣如海水或飲用水中只有少量的細(xì)菌，因而在計數(shù)前需采用濃
縮而不是稀釋。在此方法中，用真空裝置使特定體積的水通過
膜過濾。這樣，細(xì)菌就被截留在膜上，有細(xì)菌的膜然后被放在瓊脂培養(yǎng)基或者浸
泡過培養(yǎng)基的纖維墊上，使其長成單個的菌落，這就是膜過濾技術(shù)的基礎(chǔ)

為了達(dá)到分離和計數(shù)的目的，在膜上獲得合適濃度的細(xì)菌，常常需要過濾不同
體積的水。在這種情況下，選擇適合于細(xì)菌收集的膜類型和大小是至關(guān)重要的，
經(jīng)常使用網(wǎng)眼為0.45μm的硝化纖維素濾膜。在處理試樣的過程中，必須注意
處理時間、真空壓、干燥等因素，務(wù)必使生物承受的壓迫降至最小。

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