導(dǎo)語

5月25日，國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布“風(fēng)痛安膠囊中馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項(xiàng)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法”。

圖片來源：國家藥品監(jiān)督管理局

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風(fēng)痛安膠囊用于濕熱阻絡(luò)所致的痹病，癥見關(guān)節(jié)紅腫熱痛、肌肉酸楚，是治療急、慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的非處方藥。

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但由于防己的來源復(fù)雜，品種較多，且各地用藥的習(xí)慣不同，造成同物異名或同名異物；以及野生資源愈來愈少；價格攀升；藥農(nóng)誤采或有意混采等諸多原因，造成市場上經(jīng)常出現(xiàn)以同屬植物的根冒充防己，或用馬兜鈴科植物的根或莖與防己混用現(xiàn)象，這些藥材與正品防己的功效、主治相差較大。尤其用馬兜鈴科防己（漢中防己、廣防己、宜賓防己、冕寧防己、）替防己藥材進(jìn)行投料時，由于馬兜鈴科植物中含馬兜鈴酸類物質(zhì)：馬兜鈴酸（AAs）和馬兜鈴內(nèi)酰胺（ALs），已經(jīng)被證實(shí)具有腎毒性、致癌和致基因突變作用，且含馬兜鈴酸類物質(zhì)的藥用植物和制劑因此被多數(shù)國家禁用。

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針對市場上可能存在含有馬兜鈴酸類成分的馬兜鈴科防己（宜賓防己、廣防己、冕寧防己、漢中防己）替代防己藥材摻偽生產(chǎn)的風(fēng)險，建標(biāo)單位采用液質(zhì)聯(lián)用建立了風(fēng)痛安膠囊中馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項(xiàng)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法。

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以下數(shù)據(jù)及圖譜引自甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，已獲得甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院授權(quán)使用。

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檢測儀器

液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀

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色譜條件

色譜柱：Shim-pack GIST-HP C18 (2.1×100mm，3.0μm)，流速0.2 ml/min，流動相A為0.1%甲酸（含5mmol/L甲酸銨）溶液，B為乙腈，柱溫：40℃，進(jìn)樣體積2μl。進(jìn)行梯度洗脫。

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表1梯度洗脫程序

更高惰性，高耐久性

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● Shim-pack GIST C18 是在新型的更高惰性硅膠基質(zhì)上鍵合通用性的十八烷基的色譜柱，由于色譜柱的高惰性，大幅度提高了分析的精度和色譜柱的重現(xiàn)性。

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● GIST 系列色譜柱可以用于分離離子化的化合物而不易引起吸附，因此能夠得到非常尖銳的峰型和優(yōu)異的重現(xiàn)性。

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● 采用新型硅膠，GIST 系列可以耐受 pH1-10 的寬 pH 范圍流動相，在堿性的分析條件下也能得到穩(wěn)定的分離。

質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（Electronic Spray Ionization，ESI），正離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）；干燥氣溫度350℃；干燥氣流速10 L/min；霧化氣壓力30 psi；源電壓4000V；保留時間：16min；母離子359.0 m/z，子離子298.0（定量離子）m/z；子離子296.0 （定性離子）m/z。

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專屬性實(shí)驗(yàn)

在含廣防己的風(fēng)痛安膠囊為陽性樣品中，與馬兜鈴酸Ⅰ對照相應(yīng)保留時間位置上，均呈現(xiàn)上述離子流色譜峰；而陰性樣品和正常樣品中，在與馬兜鈴酸Ⅰ對照品相應(yīng)保留時間位置上均無相應(yīng)的離子流色譜峰。說明風(fēng)痛安膠囊中的其它藥味對測定無干擾。

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馬兜鈴酸Ⅰ對照（a）、陰性樣品（b）、陽性樣品（c）的離子色譜圖（m/z 359.0→298.0，296.0）

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基質(zhì)效應(yīng)考察

在液質(zhì)聯(lián)用法測定中，通常情況下，樣品中的基質(zhì)對待測成分的電離有影響。風(fēng)痛安膠囊中除了可能含馬兜鈴酸Ⅰ藥材，尚含有其它植物藥材，以相應(yīng)濃度的風(fēng)痛安膠囊陰性樣品基質(zhì)與以甲醇為溶劑的對照品溶液進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)風(fēng)痛安膠囊陰性樣品基質(zhì)對待測成分的電離響應(yīng)值影響不是很明顯。

馬兜鈴酸Ⅰ（1μg/ml）的70%甲醇溶液；（b）馬兜鈴酸Ⅰ（1μg/ml）的基質(zhì)溶液的離子色譜圖（m/z 359.0→298.0，296.0）

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工作曲線與線性范圍

取馬兜鈴酸Ⅰ對照品12.02mg，加甲醇逐步稀釋至約1.0μg/ml。取上述溶液分別進(jìn)樣0.1、0.5、1、2、4和8μl，以馬兜鈴酸Ⅰ對照品濃度（μg/ml）對色譜峰面積進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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馬兜鈴酸Ⅰ線性關(guān)系數(shù)據(jù)

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進(jìn)樣精密度

精密吸取馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液，注入液相色譜儀。連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積RSD（n=5）為2.7%，表明儀器精密度良好。結(jié)果見下表。

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進(jìn)樣精密度測定結(jié)果

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重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號的供試品溶液5份，按本標(biāo)準(zhǔn)擬定的方法平行測定，并計算樣品中待測成分的含量RSD（n=5）為2.2%，表明供試品溶液重復(fù)性良好。

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供試品溶液測定結(jié)果的重復(fù)性

回收率測定

精密稱取已知含量同一批號的樣品6份，按供試品中馬兜鈴酸Ⅰ含量的100%，精密加入馬兜鈴酸Ⅰ對照品儲備溶液0.2ml，置具塞錐形瓶中，氮?dú)獯蹈?，精密稱取樣品約1.25g于同一錐形瓶中按試品溶液的制備方法同法處理，測定馬兜鈴酸Ⅰ含量，并計算加樣回收率。

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加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.6.8 檢出限及定量限試驗(yàn)

將線性項(xiàng)下溶液圖譜進(jìn)行計算信噪比為10的為定量限，信噪比為3的為檢出限。

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以上是風(fēng)痛安膠囊中馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項(xiàng)檢測解決方案，島津針對《中國藥典》2020年版“九味羌活丸”中新增馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項(xiàng)制定了檢測方案，完整應(yīng)用報告請?jiān)趰u津官網(wǎng)下載：LCMS-8040分析中藥九味羌活丸中的馬兜鈴酸Ⅰ（復(fù)制網(wǎng)址前往瀏覽器打開）

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供試品及限度對照品（紅色：供試品，黑色：對照品20ng/mL）

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針對制劑中常用藥味“細(xì)辛”，島津創(chuàng)新中心建立了中草藥DPiMS用于馬兜鈴酸類物質(zhì)的快速篩查和定量分析方法，該方法能夠在20s 內(nèi)完成4 種馬兜鈴酸和1 種馬兜鈴內(nèi)酰胺的定性定量分析：DPiMS-8060 快速篩查和定量檢測細(xì)辛和天仙藤中的馬兜鈴酸和馬兜鈴內(nèi)酰胺。(復(fù)制網(wǎng)址前往瀏覽器打開?

標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM色譜圖（10.0μg/L）

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