波長校正
波長校正實際上就是對儀器進(jìn)行一些機(jī)械調(diào)整,來改變光源燈與
單色器的相對位置,使它們能在一條直線上,使波長指示盤是標(biāo)明
的波長與射入樣品比色杯的輻射波長一致,這樣才能保證波長讀數(shù)
與通過樣品的波長相符合,才能保證儀器的最大靈敏度,否則分析
結(jié)果就會出現(xiàn)明顯的變異,在紫外光區(qū)波長較短時尤為明顯。
有幾種化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定的物質(zhì)可用做標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),在特定的波長
范圍內(nèi)校驗儀器,例如,鐠釹用于可見光區(qū)校驗儀器,氧化釹用于
紫外光區(qū)校驗儀器,此外,還有干涉 濾光片及化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的化
學(xué)試劑及染料等可用以校正儀器。
校正方法
目前使用的分光光度計,在更換光源,重新按裝、搬運或檢修后
,以及儀器工作不正常時,都要進(jìn)行波長校正,一般每隔數(shù)日就應(yīng)
檢查一次波長,常用的方法有如下幾種。
如經(jīng)上述校正后發(fā)現(xiàn)波長讀數(shù)不在585+1nm范圍內(nèi),但能看到黃
光,說明波長不正確但偏差較小,可按下列步驟校正。
將波長度舯準(zhǔn)確對準(zhǔn)585+1nm處,打開儀器外殼,按說明書找到
波長校正螺絲。
如波長585nm,但看不到黃光時,校正手續(xù)如下:
將波長度盤準(zhǔn)確地對準(zhǔn)585nm,打開儀器外殼,找到波長調(diào)節(jié)螺
絲,在比色杯位置插入白紙條,左右輕輕旋轉(zhuǎn)波長調(diào)節(jié)螺絲,使調(diào)
整儀器輸出,使指針為50%T左右,左右輕旋轉(zhuǎn)波長調(diào)節(jié)螺絲,至透
光度讀數(shù)最低,當(dāng)透光度最低時,波長應(yīng)為585+1nm。
檢查波長刻度盤的指示值,與調(diào)節(jié)到的波長529nm誤差情況,例
如指示值為534nm,此時波長誤差為534-529=5nm.超出規(guī)定,必須
進(jìn)行調(diào)整同,將波長刻度調(diào)節(jié)到529nm處,將鐠釹片由光路拉出,
光路空白時調(diào)節(jié)100%旋轉(zhuǎn) 使電表指示為100%T,并檢查零點,再將
鐠釹片推入光路,儀器左側(cè)小蓋板,找到波長校正螺絲,反時針微
微調(diào)節(jié)波長校正螺絲,使電表的透過率指示降至最低,反復(fù)檢查波
長誤差情況,直到符合儀器技術(shù)指標(biāo)要求為止,最后將左側(cè)蓋板復(fù)
原,校正即結(jié)束。
光線校正法
單光束分光光度計用此法校正波長比較簡單,常用氫燈、氘燈和
低壓汞燈,它們可發(fā)射一系列波長為定值的射線,其范圍包括可見
光和紫外光區(qū),汞燈可發(fā)射不連續(xù)光譜如297、302、303、360、57
8nm等光波,做為波長校正使用,氘燈可發(fā)射486nm射線,也可用于
波長校正,當(dāng)波長再變更時,透光度又下降,記錄最大透光度時的
波長,然后按已知的汞線數(shù)值調(diào)正儀器的波長。顯微鏡光源為儀器
廠出品,高壓汞燈,超高壓汞燈或其它紫外線燈管,高壓汞燈是一
種可見光和長波紫外線輻射很強(qiáng)的光源,含有豐富可作為分光光度
計波長校正之用。
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