土壤樣品懸浮液的直接顯微鏡檢-生物技術(shù)研究

  微生物種群的垢顯微鏡計(jì)數(shù)法土壤懸浮液的直接顯微鏡檢是計(jì)數(shù)土
壤微生物的通用方法，土壤樣品放在攪拌器中用如焦磷鈉等試劑或洗滌
劑分散以破壞土壤團(tuán)聚體，一定體積的懸浮液或放在1 厘米面積的顯微
鏡載玻片上或在已知尺寸大小的微生物計(jì)數(shù)室內(nèi)用瓊脂混合，瓊脂硬固
后從計(jì)數(shù)室內(nèi)取出放在顯微鏡載玻片上固定和染色，這個(gè)技術(shù)稱作載玻
片技術(shù)，它提供了土壤顆粒釋烯度和已知體積內(nèi)的微生物數(shù)，此方法對
真菌計(jì)數(shù)特別有用，而對細(xì)菌計(jì)數(shù)則很困難，因?yàn)榇朔ú灰装鸭?xì)菌和土
壤顆粒區(qū)別開來，在水研究中使用很長時(shí)間的一種技術(shù)是用一種無色的
或黑色的聚多糖濾紙過濾土壤懸浮，然后將帶有微生物的濾紙固定在載
玻片上并染色同，很強(qiáng)地吸附在固體基質(zhì)上或包陷在團(tuán)聚體中的生物是
不能進(jìn)入土壤懸浮液的。

  染色技術(shù)的許多種，傳統(tǒng)的孟加拉紅和酚苯胺藍(lán)染色已在很大程度
上為熒樂染色所取代，是最古老和最廣泛地使用于細(xì)胞內(nèi)DNA 的染色，
活細(xì)胞吸收少量的染料出現(xiàn)綠色；死細(xì)胞缺乏有功能的細(xì)胞質(zhì)膜來吸收
大量的染料而顯紅色，然而，細(xì)胞的顏色也取決于染料的濃度、細(xì)胞壁
的性質(zhì)，以及細(xì)胞中RNA 與DNA 的比值，明顯區(qū)別活細(xì)胞與死細(xì)胞是困
難的，啶橙易吸附于土壤顆粒，對粘土染色不好，而對砂土染色則很有
用。
  熒光異硫氰酸鹽吸附于蛋白質(zhì)的基團(tuán)，對細(xì)菌染色是極好的，但不
吸附所有的真菌，對于真菌來說，熒光染料——聚糖鍵，使用具熒光素
的二乙酸鹽染色劑在理論上能區(qū)分活性與非活性菌絲，開始是不發(fā)熒光
染色劑的，吸附后被酯酸分裂成熒光素和己酸鹽，游離的熒光菌絲是可
以發(fā)熒光的，當(dāng)用于土壤制備物時(shí)，2%-10%的真菌菌絲能顯示出熒光，
對幼嫩菌絲和菌絲末稍是很好的指示物。

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