? 【導(dǎo)讀】馬鈴薯作為主食已納入國家十三五規(guī)劃，馬鈴薯病毒和土傳病毒是作物損失的主要原因之一，馬鈴薯的品質(zhì)和產(chǎn)量也因為種薯病毒的后期感染受到嚴(yán)重影響。及時監(jiān)測和鑒別馬鈴薯病菌和病原體對于有效控制感染從而減少損失至關(guān)重要。針對馬鈴薯育種種植和貯存等全過程病害監(jiān)測需求和質(zhì)控需求，LUMEX專家團(tuán)隊開發(fā)了馬鈴薯病害微芯片實時熒光PCR檢測技術(shù)和配套的專用方法試劑包，可實現(xiàn)準(zhǔn)確檢測多種病原體和潛伏期病菌。

?? 馬鈴薯在我國廣泛種植，已成為僅次于水稻、小麥、玉米的第四大糧食作物。然而在當(dāng)前的馬鈴薯生產(chǎn)中，病毒病發(fā)生普遍而嚴(yán)重，成為制約馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要障礙，是生產(chǎn)上亟待解決的突出問題。對于馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的參與者而言，細(xì)菌、真菌及病毒的檢測和識別十分重要。本文從病毒種類及相應(yīng)檢測方法進(jìn)行簡要介紹。

1 馬鈴薯主要病毒種類及致病癥狀

2 馬鈴薯病毒主要檢測方法

2.1 酶聯(lián)免疫吸附檢測法

????酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbentassay, ELISA）是把抗原-抗體的免疫反應(yīng)與酶的催化反應(yīng)相互結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)。該技術(shù)是在不影響酶活性和免疫球蛋白分子的反應(yīng)條件下, 使酶分子和免疫球蛋白分子共價結(jié)合成酶標(biāo)記抗體。酶標(biāo)記抗體可直接或通過免疫橋與包袱在固相支持物上待測定的抗原或抗體特異性結(jié)合,來檢測病毒的存在。

ELISA具有特異強 、靈敏度高 、操作簡便、易于觀察等優(yōu)點, 非常適合于大規(guī)模檢測, 適于脫毒苗的檢測。方法經(jīng)濟(jì)簡便，快速直觀，但其也存在一定的缺點:

（1）抗體的制備所需時間長，費時費力；

（2）一次只能檢測一種病毒，檢測多種病毒時靈敏度降低；

（3）對于蚜蟲傳播的?。挥幸恍┰谥参锷系谝荒瓴槐憩F(xiàn)癥狀,病毒繁殖量少,無法用 ELISA方法檢測；

（4）檢測病毒時還經(jīng)常存在假陽性反應(yīng)，給脫毒種薯 (苗 )的檢測帶來困難。

2.2 PCR檢測法

??? 近來，由于PCR檢測的特異性和靈敏性，被廣泛運用于許多細(xì)菌、真菌、病毒和類病毒的檢測。但是，運用普通的PCR分析儀檢測多種病原菌時，不僅十分耗時，而且對實驗室條件要求嚴(yán)格且需要很長的反應(yīng)設(shè)置時間，易造成人為誤差。PCR試劑的運輸和貯存對溫度要求嚴(yán)格，需要低溫環(huán)境或干冰包裝，溫度的變化會直接影響到反應(yīng)的結(jié)果。LUMEX公司自主研發(fā)生產(chǎn)的實時微芯片PCR及凍干微芯片，完美克服了普通PCR的局限性。

主要有以下特點：

（1）可同時檢測8-10種馬鈴薯病毒；

（2）實時定性定量分析：先進(jìn)實時熒光微芯片PCR技術(shù)可實現(xiàn)快速定量定性分析檢測；

（3）專利微芯片技術(shù)：樣品載體以芯片代替?zhèn)鹘y(tǒng)離心管，試劑耗量小，上樣量僅1-2μl；

（4）加熱/冷卻速度快：最大升溫速度12℃/秒；最大降溫速度10℃/秒；提高反應(yīng)特性

（5）分析快速時間短，DNA樣本分析30min，RNA樣本分析50min完成檢測；

（6）開放和凍干體系：可選配專用檢測方法試劑包和相應(yīng)凍干微芯片；

（7）運輸儲存成本低：固定有PCR試劑的芯片，可以在室溫下貯存和運輸，用戶使用更便利;

??? 目前LUMEX有三種商品化凍干微芯片已運用于馬鈴薯產(chǎn)業(yè)中：主要用于植物病原菌RNA、植物病原菌DNA、土壤中線蟲的DNA的檢測。目前已在俄羅斯，加拿大等國外市場普遍應(yīng)用。

具體操作步驟

2.3 其他方法

???寄主生物學(xué)檢測法，抗血清檢測法及電鏡檢測法等檢測方法。

3 小結(jié)

??? 高效可靠的病毒檢測手段是確保馬鈴薯脫毒種薯(苗)無毒的前提和基礎(chǔ)，LUMEX實時微芯片PCR及馬鈴薯凍干微芯片整體解決方案必是最經(jīng)濟(jì)有效的不二選擇。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 李入賢，張文龍，施文娟. 馬鈴薯脫毒種薯(苗)病毒檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J].種子，2009，28（4）：60-62.

[2] 羅燕娜，劉江娜，王航. 馬鈴薯病毒種類及主要病毒檢測方法[J].實驗技術(shù)，2015,(3):65-67.

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