原生質(zhì)體培養(yǎng)技術(shù)有多種最常用固體平板方法

  酶解后可將材料經(jīng)過(guò)一個(gè)有合適孔徑的不銹鋼網(wǎng)或尼龍布過(guò)濾
和離心以除去酶液。碎片和細(xì)胞。未消化的組織，然后再加新的滲
透壓穩(wěn)定液或培養(yǎng)液和反復(fù)離心以洗凈酶液和碎片，也可以采用漂
浮法、兩相法等進(jìn)行原生質(zhì)體純化，制備出的原生質(zhì)懸浮液應(yīng)取樣
在顯微鏡下檢查，或用低滲溶液觀察是否破裂，

  最好是用熒光增白劑來(lái)鑒定脫壁的效果。如仍有殘存的細(xì)胞壁
則在紫外光照射下鏡檢可見(jiàn)到熒光，如果是原生質(zhì)體則沒(méi)有熒光。
然后再取樣測(cè)定原生質(zhì)體的活力，可用活體染色、觀察有無(wú)胞質(zhì)環(huán)
流，測(cè)定光合作用。  呼吸作用等、較好的方法是用熒光雙醋酸酯
(FDA)染色

原生質(zhì)體培養(yǎng)方法
  原生質(zhì)體的培養(yǎng)方法有多種。最常用的是固體平板法，簡(jiǎn)易方
便又可定點(diǎn)觀察。其他如懸滴培養(yǎng)、液體淺層培養(yǎng)。雙層培養(yǎng)(液
體／固體。固體／固體)、x平板培養(yǎng)、固體小塊培養(yǎng)、混合培養(yǎng)等
都可根據(jù)試驗(yàn)需要選擇采用，原生質(zhì)體的培養(yǎng)基通常是參考細(xì)胞或
組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基修改而來(lái)，主要的差異是：原生質(zhì)體培養(yǎng)基中需
加有一定量的滲透壓穩(wěn)定劑，生長(zhǎng)素和激動(dòng)素或其他植物激素的種
類(lèi)和濃度也可參考細(xì)胞或組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基而修改：有的植物材料
，雖然參考其細(xì)胞或組織培養(yǎng)基而設(shè)計(jì)出了原生質(zhì)體培養(yǎng)基也不能
解決問(wèn)題，原因有待探尋。

(本文由上海光學(xué)儀器廠編輯整理提供, 未經(jīng)允許禁止復(fù)制http://www.sgaaa.com)