本文來自書籍Analytical Method Validation and Instrument Performance Verification，作者為Chung Chow Chan, Herman Lam, Y. C. Lee, Xue-Ming Zhang。

　　本文翻譯自：

　　Chaper 4 DISSOLUTION METHOD VALIDATION

　　本文作者：

　　CHUNG CHOW CHAN, PH.D., NEIL PEARSON, AND ANNA REBELO-CAMEIRAO

　　Eli Lilly Canada, Inc.

　　Y. C. LEE, PH.D.

　　Patheon YM, Inc.

　　4.1簡介

　　在藥物分析實驗室中，溶出測試方法是一種最常見的分析技術(shù)，主要應(yīng)用于口服固體制劑的體外溶出測定。溶出測試可以作為描述制劑特性的方法(如含量、有關(guān)物質(zhì))的補充。

　　一個好的溶出測試方法應(yīng)能提供三個關(guān)鍵方面的信息。

　　首先，溶出方法應(yīng)能夠檢測產(chǎn)品由于理化性質(zhì)變化引起的藥物釋放速率或量的變化。這些信息有助于建立批與批(batch-to-batch)生產(chǎn)一致性的質(zhì)控。

　　其次，溶出方法應(yīng)能區(qū)分在開發(fā)階段使用不同工藝和/或處方制備的產(chǎn)品。

　　最后，建立體內(nèi)-體外相關(guān)性后，溶出應(yīng)能反應(yīng)人體內(nèi)藥物的釋放和吸收速率。

　　然而，并不是所有藥物的溶出方法都能滿足以上三個方面的功能。

　　譯者注解：我們假設(shè)一種極端情況，如果片劑不能崩解，其中的活性成分不能溶出，即使含量與有關(guān)物質(zhì)均符合規(guī)定，那也不會產(chǎn)生應(yīng)有的藥效。因此可以看出溶出度是口服固體制劑的一項關(guān)鍵質(zhì)量屬性，評價它的就是溶出度檢測方法。

　　溶出度檢測方法需要能區(qū)分影響溶出度的關(guān)鍵工藝參數(shù)的變化，例如難溶性API的粒徑(或粒徑分布)、制粒參數(shù)、處方比例等。這些一般在不同批次間都可能存在差異，溶出度方法應(yīng)能區(qū)分這些差異。這就是溶出度方法強調(diào)區(qū)分力的原因。需要注意的是，這和溶出速度快慢并不是必然的關(guān)系。同時溶出度方法也需要對貯存期間樣品物理化學(xué)性質(zhì)的變化具有一定的敏感性，例如晶型轉(zhuǎn)變、自身聚集、脫水、吸濕等，如果這種變化可能影響藥物釋放的話。

　　質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載的溶出度方法應(yīng)當(dāng)滿足上述兩個要求，不強求需要有體內(nèi)外相關(guān)性，這就是譯文中“不是所有藥物的溶出方法都能滿足以上三個方面的功能”的情況。在研究階段，會尋找具有體內(nèi)外相關(guān)的溶出條件，但不一定能找到。因為藥物在體內(nèi)產(chǎn)生藥效有四個過程，即“溶出、吸收、分布、代謝”，溶出僅僅是其中一個環(huán)節(jié)，后面的三個環(huán)節(jié)并不一定與其有良好的對應(yīng)關(guān)系。因此質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制定溶出度方法，更重要的是評價自身批內(nèi)與批間的質(zhì)量一致性，不要迷戀體內(nèi)外相關(guān)。

　　對于一個非藥典的產(chǎn)品(如新產(chǎn)品)，盡可能開發(fā)一個標(biāo)準(zhǔn)藥典溶出方法。在方法開發(fā)與驗證中，應(yīng)考慮EP、JP和USP的法規(guī)要求。盡管USP通常要求速釋制劑(IR)測試單點的溶出度，但對于中等溶解和略溶的藥物，在方法開發(fā)過程中仍需測定多時間點的溶出數(shù)據(jù)以更好研究產(chǎn)品的特性。

　　4.2 章節(jié)介紹

　　本章概述了藥物溶出方法驗證的一般要求。溶出方法的開發(fā)和驗證階段與其他測試方法一樣，都不是很明確的。因此，本章有時會論述一些關(guān)于開展調(diào)查的補充意見。這個討論是基于小分子藥物的方法驗證，重點關(guān)注制藥行業(yè)的現(xiàn)行法規(guī)要求。因為方法驗證貫穿于產(chǎn)品開發(fā)過程中的不同階段，因此本章提供的信息主要適用于根據(jù)ICH指導(dǎo)原則準(zhǔn)備提交注冊申請(如NDA)時進行的最終溶出方法的驗證。

　　溶出方法包括兩個步驟：樣品制備和樣品分析。本章“樣品制備”是指樣品溶出的過程，包括樣品液的收集。從溶出裝置收集的樣品液可能直接進行分析或需要進一步處理(如稀釋)獲得最終的樣品液。

　　譯者注解：溶出包括兩個過程：溶出取樣與分析。在做溶出方法驗證的時候應(yīng)對這兩個過程都進行相應(yīng)的驗證。目前我們大多將方法驗證的重點放在分析這塊，忽略了溶出取樣過程的驗證。

　　含有新化學(xué)實體(NCEs)的固體口服制劑通常制成片劑或膠囊。NCEs后續(xù)開發(fā)可能會研究其更特殊的藥物遞送系統(tǒng)。標(biāo)準(zhǔn)的口服片劑或膠囊的溶出方法通常使用槳法或籃法裝置。在這章中我們主要關(guān)注使用這兩種裝置進行方法開發(fā)和后續(xù)的方法驗證。

　　4.3 策略、驗證試驗和參數(shù)

　　驗證要求包括溶出樣品制備和樣品分析。本章重點討論溶出方法驗證的注意事項。驗證是為了評估擬定測試方法的性能。任何成功的驗證結(jié)果都是一組全面數(shù)據(jù)，能夠支持方法的預(yù)期目的。因此，執(zhí)行一個沒有明確計劃的驗證會遇到許多困難，包括產(chǎn)生不完整的或有缺陷的驗證數(shù)據(jù)。有計劃的驗證必須包括以下內(nèi)容：確定需要評估的項目(strategy)、如何評估每個項目(experimental)和預(yù)期最低標(biāo)準(zhǔn)(criteria)。強烈推薦準(zhǔn)備一個清楚規(guī)定實驗操作和相應(yīng)接受標(biāo)準(zhǔn)的驗證方案。方法驗證必須包括樣品制備和樣品分析的評估。ICH Q2A(1)提供了溶出方法驗證的指導(dǎo)原則，見表4.1。

　　溶出方法驗證要求與含量方法驗證是相似的，雖然沒有在表4.1中列出，但應(yīng)該評估方法中不同參數(shù)的耐用性(如樣品溶液的穩(wěn)定性)，這些要求詳見2.4章節(jié)。

　　4.3.1樣品制備

　　通常，溶出介質(zhì)的體積為500-1000mL，溫度保持在37.5±0.5℃，測試裝置(如籃或槳)固定到軸上后，調(diào)節(jié)至規(guī)定的轉(zhuǎn)速。按照藥典要求將裝置固定到軸上的相對位置上。在溶出過程中，應(yīng)蓋住溶出杯防止溶出介質(zhì)的蒸發(fā)。

　　當(dāng)使用籃法裝置時，應(yīng)將樣品放在干燥的籃里，籃固定在連接的圓盤上，然后降低至規(guī)定的位置，立即開始轉(zhuǎn)動。當(dāng)使用槳法時，樣品應(yīng)在溶出杯的底部，立即按規(guī)定轉(zhuǎn)速開啟槳。如果要求使用沉降裝置(Sinker)，樣品應(yīng)放在沉降裝置中，使其沉于溶出杯底部。在合適的時間點取樣，用合適的方法濾過，濾液作為樣品溶液。分析樣品溶液中的藥物，以相對標(biāo)示量的百分含量表示規(guī)定時間的溶出量。

　　三大藥典中關(guān)于籃法和槳法裝置的要求是相似的，但也有一些不同。這些常見的要求匯總見表4.2。在方法開發(fā)時，知道這些差異是很重要的。在溶出裝置定期校驗時，其中的一些特征指標(biāo)(如桿的位置，桿的轉(zhuǎn)速變化和槳到溶出杯底部的距離)會作為系統(tǒng)檢查。

　　表4.2 籃法和槳法溶出裝置藥典規(guī)定允許桿轉(zhuǎn)速的變化±4%±4%±4%裝置底部與溶出杯底部內(nèi)壁的距離25±2mm25±2mm25±2mm裝置系統(tǒng)測試溶出校正片，崩解型和非崩解型無規(guī)定無規(guī)定溶出介質(zhì)的溫度37 ?± 0.5?C37 ?± 0.5?C37 ?± 0.5?C加入的溶出介質(zhì)胃蛋白酶最大750000單位/1000mL或胰酶最大10USP單位/1000mL無規(guī)定吐溫80最大1% ?w/v取樣籃或槳葉的上邊緣到溶出介質(zhì)液面的中間位置；離杯壁不小于1cm籃或槳葉的上邊緣到溶出介質(zhì)液面的中間位置；離杯壁不小于1cm籃或槳葉的上邊緣到溶出介質(zhì)液面的中間位置；離杯壁不小于1cm允許沉降裝置螺旋金屬絲或其他驗證過的沉降裝置合適的沉降裝置（如螺旋金屬絲或玻璃絲）固定形狀的沉降裝置數(shù)據(jù)解釋6+6+1266+6S1?每片不少于Q+5%6片都不小于Q前6片或12片中的10片滿足規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)S2 ?12片（S1+S2）的平均值≥Q，沒有一片小于Q-15%

S3 ?24片（S1+S2+S3）的平均≥Q，不超過2片小于Q-15%，沒有一片小于Q-25%

　　4.3.2定性溶出方法

　　通過觀察制劑的溶出現(xiàn)象，可以在不進行樣品分析時就能很快的發(fā)現(xiàn)處方或溶出方法的問題。這在處方開發(fā)和方法開發(fā)前期是特別有用的，當(dāng)篩選多個處方或多種溶出介質(zhì)時應(yīng)進行考慮。

　　在方法最初開發(fā)階段，溶出方法的定性評估可以節(jié)約大量的時間，某一測試的要求沒有滿足，可以不進行樣品分析。一些可能觀察到的劑型性能和相關(guān)問題如下：

　　膠囊殼或片劑的包衣開始破裂需要的時間，這提示膠囊殼或包衣可能引起藥物延遲釋放的問題(如明膠的交聯(lián)作用)

　　完全崩解需要的時間，暗示劑量單位可能影響活性成分的釋放(如過度壓制的膠囊粉末或片芯)。

　　膠囊在特定沉降裝置內(nèi)的行為(如膠囊粘在籃網(wǎng)上)。

　　在溶出杯內(nèi)混合的效果。堆積(在溶出杯底部形成一堆不溶性的輔料顆粒)可能需要更高的轉(zhuǎn)速或用不同的裝置(用籃法代替槳法)。

　　介質(zhì)脫氣方法的適用性。溶出過程中的氣泡可影響活性成分的釋放速度。

　　表4.3顯示膠囊劑的溶出結(jié)果。通過一系列實驗研究兩種沉降裝置。當(dāng)使用不同沉降裝置時，通過溶出試驗的定性評價比較膠囊的溶出行為。沉降裝置B是這個處方的最適宜裝置。一旦使用這個最適宜沉降裝置重復(fù)試驗，溶出試驗就會顯示出良好的低變異性結(jié)果。

　　表 4.3 溶出15分鐘時的觀察與分析

膠囊沉降裝置（類型A）膠囊沉降裝置（類型B）
序號觀察釋放量的RSD%觀察釋放量的RSD%1正常崩解1.6正常崩解32正常崩解1.7正常崩解1.73一些明膠交聯(lián)作用（成膜）13.9正常崩解1.34一些明膠交聯(lián)作用（成膜）32.1正常崩解1.7

　　4.3.3樣品制備過程的驗證

　　應(yīng)采用不同的方法來驗證溶出測試中的樣品制備過程。驗證的目的是為了證明這個方法是符合其預(yù)期目的的。例如，一個策略是，在方法開發(fā)時(方法正式驗證前)證明不同樣品制備方法的有效性。最后的驗證將會確認(rèn)方法開發(fā)時所作的工作。方法開發(fā)和驗證過程遵循的策略取決于分析實驗室的文化、專業(yè)化程度和策略。

　　譯者注解：方法驗證的結(jié)果如何，在方法開發(fā)階段已經(jīng)決定了。方法驗證時只是將開發(fā)好的方法以數(shù)據(jù)證明其合理性。這是QbD理念在方法開發(fā)驗證中的體現(xiàn)，在方法開發(fā)階段對方法進行適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險評估，可以大大減少方法驗證出問題的可能性。比如溶出取樣常見的風(fēng)險包括：濾膜吸附、API在介質(zhì)中的穩(wěn)定性、儀器參數(shù)如溫度的偏離等。在方法開發(fā)階段進行了相應(yīng)的驗證，就保證了方法驗證的順利完成。當(dāng)然還有一些未描述的基于對樣品了解可能存在的其他風(fēng)險也需要進行評估。這些理念并不只是用于溶出取樣階段，其他檢測方法的開發(fā)驗證的理念也是相通的。

　　(1)裝置

　　劑型的性質(zhì)將決定方法開發(fā)和驗證時使用的溶出裝置的類型。當(dāng)選擇溶出裝置時必須了解下面的問題：

　　這是一個膠囊嗎?

　　需要使用沉降裝置嗎?

　　藥物在介質(zhì)中溶出后的穩(wěn)定性怎么樣?

　　是速釋還是緩釋制劑?

　　這是皮膚貼劑嗎?

　　USP溶出裝置1(籃法)和2(槳法)通常用于速釋制劑。USP裝置3(往復(fù)筒法)是測試緩釋制劑或要求多個pH的溶出曲線和時間點劑型的選擇。小劑量的產(chǎn)品可能要求使用流池法分析或小體積測試技術(shù)(非藥典規(guī)定的100、200mL溶出杯)。在方法開發(fā)時，一旦裝置被選擇且證明是合適的，那么在方法驗證時就不需要再評估其他的裝置。

　　(2)溶出介質(zhì)

　　水、鹽酸(0.1N)和不同pH緩沖鹽是常用的溶出介質(zhì)。盡管水是常用的溶出介質(zhì)，但因為水沒有控制pH，應(yīng)避免使用。水的pH受處方組成(包括活性成分)的影響很大。缺少pH的控制可能導(dǎo)致溶出曲線發(fā)生改變。輔料發(fā)生變化或因制劑降解而發(fā)生的變化可能會導(dǎo)致pH的改變。鹽酸(0.1N)常作為溶出介質(zhì)使用，因為其可以模擬胃的酸性環(huán)境。其他溶出介質(zhì)(如pH4.5或6.8緩沖液)可以用來模擬患者的胃的狀態(tài)(如空腹或進食)或改善釋放曲線特征和/或區(qū)分力。對于低溶解性藥物，可使用表面活性劑(如吐溫80)來改善溶出曲線。

　　在方法開發(fā)和驗證時，溶出介質(zhì)的選擇取決于以下因素：

　　藥物的溶解性

　　劑型的性質(zhì)

　　藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)

　　脫氣在溶出方法開發(fā)和驗證中是很重要的因素，因為它可以影響藥物的釋放速度。理想情況下，一個方法不應(yīng)該受脫氣方法的影響。至少應(yīng)證明脫氣程度不會顯著改變?nèi)艹鲈囼灥慕Y(jié)果。需要注意的是，含有表面活性劑的介質(zhì)不應(yīng)被脫氣，因為這可能導(dǎo)致過多的氣泡產(chǎn)生。

　　常用的溶出介質(zhì)脫氣方法有三種：

　　(1)真空過濾法

　　(2)氦氣脫氣法

　　(3)加熱法

　　真空通常應(yīng)用在溶解介質(zhì)過濾后，濾液持續(xù)暴露于真空泵所產(chǎn)生的低真空中(加熱或不加熱)。真空泵的水壓力(例如真空度)可能會影響這種脫氣的方法。應(yīng)該確保有足夠的吸力。應(yīng)該注意暴露的時間。

　　氦氣脫氣法常用于去除HPLC流動相中溶解的氣體。同樣的原理可以用于介質(zhì)的脫氣。應(yīng)該注意吹氦氣的時間，因為它是溶出試驗的一個關(guān)鍵參數(shù)。

　　加熱是這三種方法中最不常用的溶出介質(zhì)脫氣方式。這種技術(shù)中，過濾的介質(zhì)要加熱到37℃以上(達(dá)到約90℃)，并不斷攪拌使溶解的氣體消失。溫度和時間間隔是確定脫氣程度的重要因素。

　　通過測定介質(zhì)中最終的含氧量，可以確定脫氣技術(shù)是否有效。應(yīng)在使用介質(zhì)前進行脫氣，以免再溶解氣體。然而在使用前脫氣，并不是可行的。因此，應(yīng)該有數(shù)據(jù)支持使用某種程度上在空氣中再暴露介質(zhì)的結(jié)果及可以接受溶解氧的水平。

　　譯者注解：溶出度方法驗證很少驗證溶出介質(zhì)的脫氣，比如驗證脫氣的方式和程度。但這并不說明該項一定可以不用研究，如果脫氣程度對溶出結(jié)果有非常大的影響，則應(yīng)對脫氣進行相應(yīng)的驗證。檢測方法涉及的某項操作是否需要驗證，取決于該項操作對結(jié)果可能產(chǎn)生影響的程度，即風(fēng)險的高低。方法驗證中需要驗證的內(nèi)容，應(yīng)該是基于我們對方法的了解，基于風(fēng)險的判斷。

　　(3)轉(zhuǎn)速

　　在溶出方法的開發(fā)和驗證中，籃法或槳法的轉(zhuǎn)速是一個重要因素?；@法常用100rpm，槳法常用50rpm。方法驗證中，需要確保轉(zhuǎn)速的微小變化不會影響溶出試驗結(jié)果。藥典規(guī)定的轉(zhuǎn)速在±4%內(nèi)變化，但是方法耐用性應(yīng)考慮更大的變化(如±10%)

　　譯者注解：耐用性驗證的區(qū)間應(yīng)該考慮較大的范圍，使方法在不同儀器上都有良好的重現(xiàn)性。不要說儀器已經(jīng)做了機械性能的驗證，就可以不用做相關(guān)耐用性驗證了。儀器機械性能驗證只是說明儀器的機械性能的偏差在允許的范圍內(nèi)，而耐用性是證明這種偏差不會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。

　　(4)樣品收集

　　在方法開發(fā)和驗證過程中，樣品制備需要考慮樣品收集的兩個方面：

　　(1)從溶出杯中取出樣品溶液;

　　(2)樣品溶液的澄清度(過濾)。

　　在方法開發(fā)和驗證時，需要考慮在質(zhì)控實驗室建立自動或手動取樣的可行性。如果選擇自動取樣，必須證明等同于手動取樣。

　　在自動取樣系統(tǒng)中，管路中有殘留可能會引起正偏差。對于這一點必須進行調(diào)查確認(rèn)是否發(fā)生殘留，并在可接受范圍內(nèi)。根據(jù)殘留量的大小，可能需要為系統(tǒng)制定一個特定的清洗程序，確保殘留量降低至最小。

　　另一方面，管路的吸附作用將會引起負(fù)偏差。如果這個偏差太高，可能有必要規(guī)定樣品取樣只能為手動方法。

　　最后，比較自動和手動取樣時，應(yīng)該考慮取樣探頭可能會改變杯內(nèi)的流體動力學(xué)。理論上，取樣探頭只有在取樣時才可以浸在溶出杯中。

　　溶出樣品收集時需要過濾。過濾掉可能干擾樣品分析的輔料是很有必要的。進行適當(dāng)?shù)幕厥章恃芯亢陀涗浭潜匾摹Ｈ魏斡^察到的偏差都應(yīng)該進行說明。過濾必須在取樣時進行，而不是在過一段時間以后。

　　譯者注解：手動取樣和自動取樣應(yīng)評估結(jié)果的一致性。自動取樣存在管路吸附和殘留的風(fēng)險，需要評估可能產(chǎn)生的影響，并制定相應(yīng)的處理措施。

　　(5)非USP方法

　　新處方研究的溶出方法的開發(fā)和驗證通常會使用到非藥典方法(如peak杯、特殊沉降裝置)。在方法開發(fā)和驗證過程中，應(yīng)評估這些方法的適應(yīng)性。

　　(6)清潔驗證

　　一旦清洗干凈溶出杯后，需要進行“空白”的溶出測試，以確保溶出杯的清潔方法是適當(dāng)?shù)?，不會引起污染?p>　　在方法開發(fā)或驗證時，或在測定方法中，任何的清潔方法都必須確認(rèn)。在實驗設(shè)計中，可研究樣品取樣過程的耐用性，研究所有或部分之前討論的參數(shù)。表4.4顯示了44次影響因素試驗設(shè)計統(tǒng)計分析的數(shù)據(jù)。設(shè)計試驗研究脫氣、介質(zhì)濃度、槳高度、槳轉(zhuǎn)速和取樣時間的影響。在此方法中，模擬了方法操作條件的正常變化。

　　介質(zhì)濃度、槳葉高度和沉降裝置因素的p值表示無顯著影響(p值>0.05)。然而，即使觀察到在介質(zhì)脫氣、槳轉(zhuǎn)速和取樣時間方面的統(tǒng)計意義，但這些影響是微不足道的。

　　表4.4 JMP耐用性分析匯總因素因素范圍p-值影響評估（%溶出度）脫氣Yes/no0.00590.5介質(zhì)濃度0.08-0.12N>0.050.1槳轉(zhuǎn)速45-55rpm0.00020.9槳高度15-35mm>0.050.1沉降裝置類型3個螺旋>0.050.3取樣時間13-17min0.00140.7

　　譯者注解：可以參考這個表做相應(yīng)的取樣參數(shù)耐用性驗證，但不必完全一致。比如介質(zhì)濃度，如果介質(zhì)濃度產(chǎn)生偏離的風(fēng)險很小，就不必驗證。

　　4.3.4分析方法驗證

　　如前文所述，溶出分析方法的驗證將根據(jù)指導(dǎo)原則進行，類似于第2章節(jié)的描述，驗證參數(shù)已進行了詳細(xì)的討論。本章著重強調(diào)溶出方法的驗證要求。

　　線性

　　制備覆蓋樣品濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。ICH Q2B建議±20%范圍。通常從25%-125%的正常濃度范圍進行線性測試，這個范圍覆蓋了早期的溶出時間點。目測響應(yīng)相對于濃度應(yīng)是一條直線。應(yīng)報告相關(guān)系數(shù)(r)、殘差和y軸截距。對于緩釋產(chǎn)品的溶出曲線，配制規(guī)定范圍的±20%濃度。例如，對于溶出度為20-90%的釋放曲線，范圍應(yīng)是0-110%。

　　準(zhǔn)確度

　　準(zhǔn)確度是對已知濃度的樣品溶液(如加標(biāo)樣品)進行測定。在進行實驗時，線性和準(zhǔn)確度溶液可能使用相同的儲備溶液。準(zhǔn)確度溶液必須在正常試驗條件下進行(如在加熱的溶出杯內(nèi)混合)。測定取樣和分析樣品溶液引起的偏差。如果產(chǎn)品需要測定溶出曲線，需在不同濃度下進行準(zhǔn)確度的測試(如在理論溶出量的40%，75%和110%)，結(jié)果以百分比的形式表示。

　　精密度

　　重復(fù)性試驗是指使用同一臺溶出儀制備6份溶出樣品進行測定。

　　中間精密度是指不同的分析者及不同的儀器設(shè)備制備6份溶出樣品進行中間精密度測定。然而，這個過程無法區(qū)分方法變化和片與片的變化。它將預(yù)測最壞情況下的精密度，包括片與片之間、取樣和分析的變化。

　　測定緩釋處方多個取樣點的溶出曲線的精密度，通常最后一個取樣點可以消除片與片之間和批次之間的差異。圖4.1闡明了扣除片與片之間的差異的標(biāo)準(zhǔn)溶出曲線，然而標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)僅作為研究手段用于方法開發(fā)。最后處方應(yīng)該在最后時間點完全釋放?？梢允褂迷摲椒ㄟM行標(biāo)準(zhǔn)化，以消除批與批之間的變化，公式如下：

　　%t：表示t時間的溶出度%

　　范圍

　　溶出度測試的線性、準(zhǔn)確度和精密度結(jié)果有助于范圍的確定(單點理論溶出的25%-125%，緩釋產(chǎn)品溶出曲線規(guī)定值的±20%)

　　HPLC分析的耐用性

　　與HPLC含量和有關(guān)物質(zhì)方法相似，應(yīng)研究色譜柱、流動相、HPLC溶液穩(wěn)定性和波長的影響。對于溶液穩(wěn)定性，應(yīng)在不同天分析之前的樣品溶液或在同一天分析新配制的溶液。

　　UV-Vis分析的耐用性

　　在分析方法驗證時，應(yīng)研究波長準(zhǔn)確性、波長重復(fù)性，稀釋溶劑(如pH、濃度)、溶液穩(wěn)定性和脫氣情況。

　　專屬性

　　對于HPLC分析，應(yīng)該證明原料與輔料、系統(tǒng)干擾峰是可以分離的。對于UV-Vis分析，空白輔料的吸收不應(yīng)太大。需要注意的是，溶出方法不需要具有穩(wěn)定性指示能力、不必將降解物峰與被分析物分離。

　　譯者注解：溶出度結(jié)果允許較大的誤差，我們應(yīng)該注意到溶出度的可接受標(biāo)準(zhǔn)都是整數(shù)，不同于含量測定的小數(shù)點后一位的可接受標(biāo)準(zhǔn)。因此較小量的雜質(zhì)對溶出結(jié)果的影響可以忽略，比如質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中總雜不得過1.0%之類，在進行專屬性驗證時可不驗證已知雜質(zhì)的分離情況。個人認(rèn)為含量測定方法驗證也是同理，之前含量測定很多用紫外進行檢測，這種方法并不能排除雜質(zhì)的干擾，應(yīng)當(dāng)是忽略掉了。

　　4.4 溶出方法的再驗證

　　在溶出方法的生命周期中，很多情況要求進行方法的再驗證。這些與第2章節(jié)中的含量測定是相似的。

　　4.5 常見問題與解決方案

　　以下我們總結(jié)了溶出方法中常見的缺陷，在方法驗證中可能會導(dǎo)致一些問題。關(guān)于分析部分的常見問題與第2章節(jié)中含量測定是相似的。

　　4.5.1.溶出試驗的負(fù)偏差

　　圖4.2列出了3個分析結(jié)果，與分析1相比，分析2和3均較低。分析1代表100%藥物釋放的正常溶出曲線。

　　驗證過程中可能引起的一些負(fù)偏差的原因包括：

　　?標(biāo)準(zhǔn)曲線和分析物線性響應(yīng)的影響;

　　由于樣品濃度較低引起的較大的負(fù)偏差，這可能是由于被分析物與各種材料，如輔料、裝置表面和/或濾器等吸附造成負(fù)干擾。

　　由于較高的樣品濃度引起的較大的負(fù)偏差，這可能是由于溶解性較差，取樣后溫度由37℃到室溫(或冷藏)進行分析，導(dǎo)致樣品析出(沉淀)。

　　與樣品濃度無關(guān)的負(fù)偏差：

　　?樣品溶液的組成與對照品溶液不匹配，導(dǎo)致樣品出現(xiàn)較低的響應(yīng)。這可能是由于對照品溶液和樣品溶液制備方法不同或溶出介質(zhì)中的負(fù)基質(zhì)效應(yīng)引起的(如pH改變)。

　　溶出過程中或溶出后階段發(fā)生了樣品降解，與對照品溶液相比，改變了樣品溶液的響應(yīng)。

　　?計算多點(曲線)的樣品分析，前面取樣點沒有校正樣品和介質(zhì)體積的變化引起的偏差。這種偏差隨著取樣體積和取樣時間的增加而增加。

　　4.5.2.溶出試驗的正偏差

　　圖4.3顯示一個高于正常曲線(100%釋放)的正偏差。

　　產(chǎn)生正偏差的可能原因包括：

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線和分析物線性響應(yīng)的影響;

　　由于樣品濃度較低引起的較大的正偏差，這可能是由于被分析物與各種材料，如輔料、溶出杯殘留、取樣裝置和濾器等造成的正干擾。

　　與樣品濃度無關(guān)的正偏差：

　　?如果使用UV-Vis直接測定，相比依賴降解物吸收的對照品，樣品溶出過程中或溶出后階段發(fā)生了降解，改變了樣品溶液的響應(yīng)。

　　?樣品溶液的組成與對照品溶液不匹配，導(dǎo)致樣品溶液有高的響應(yīng)偏差。這可能是由于對照品溶液和樣品溶液制備方法不同或溶出介質(zhì)中的正基質(zhì)效應(yīng)引起的(如pH改變)。

　　?蒸發(fā)損失會導(dǎo)致偏差結(jié)果，特別是對于延長溶出周期的情況(如從幾小時至幾天)

　　4.5.3.溶出儀的校驗

　　溶出儀應(yīng)定期進行校驗。每次進行溶出試驗時，應(yīng)該檢查校驗狀態(tài)和校驗的有效期。

　　4.6溶出方法驗證總結(jié)

　　應(yīng)采用表格的方式對溶出方法驗證進行總結(jié)，這可以快速瀏覽驗證數(shù)據(jù)。表格中應(yīng)列出ICH規(guī)定的詳細(xì)驗證要求和驗證結(jié)果。總之，支持方法驗證的必要數(shù)據(jù)都應(yīng)包括。表4.5是一個例子：

　　譯者總結(jié)性的注解：溶出方法的驗證應(yīng)包括兩大塊：一是溶出取樣過程的驗證，包括溶出介質(zhì)處理(脫氣、不同成分的加入順序等)、供試品在溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性、不同類型儀器(如自動取樣與手動取樣)、不同品牌儀器的結(jié)果一致性驗證、儀器參數(shù)的耐用性驗證(溫度、轉(zhuǎn)速等)、過濾操作的驗證(濾膜和注射器吸附)、取樣時間(自動取樣可省略)等。另一塊是分析方法的驗證，這塊內(nèi)容著述非常多，就不再贅述。

　　參考文獻

　　ICH Harmonized Tripartite Guidelines, ICH Q2A, Text on Validation of Analytical Procedures, Mar. 1995; ICH Q2B, Validation of Analytical Procedures: Methodology, May 1997.

　　European Pharmacopoeia, 4th ed., Section 2.93, Dissolution Test for Solid Dosage Forms, 2002.

　　United States Pharmacopeia, USP 26 Chapter <711>, Dissolution, 2003.

　　Japanese Pharmacopoeia, 14th ed., Chapter 15, Dissolution Test, pp. 33–36, 2001.

　　Japan Ministry of Health & Labour Guidelines, PAB/PCD No. 487, Dec. 1997.