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沖破傳統(tǒng)文化光學儀器色散臨界值:下一代Nanoimager可巧妙做到極限辨識紫外光掃描

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-06-26  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):28
核心提示:近年來,隨著活細胞體系單分子熒光成像技術的發(fā)展,膜蛋白單分子研究,特別是受體動力學的研究,已成為目前單分子研究領域中最活躍的研究方向之一。近幾年發(fā)展起來的超分辨成像技術因其能夠突破光學衍射極限,而比傳統(tǒng)光學顯微鏡具有更高的分辨率和更高的定位

近年來,隨著活細胞體系單分子熒光成像技術的發(fā)展,膜蛋白單分子研究,特別是受體動力學的研究,已成為目前單分子研究領域中最活躍的研究方向之一。近幾年發(fā)展起來的超分辨成像技術因其能夠突破光學衍射極限,而比傳統(tǒng)光學顯微鏡具有更高的分辨率和更高的定位精度。

英國Oxford Nanoimaging公司最新推出的超分辨熒光顯微鏡—Nanoimager,由牛津大學Achillefs Kapanidis教授團隊經(jīng)過8年時間研發(fā)而成,是全球第一臺大視野單分子FRET顯微鏡,將以超強的分辨率在單分子示蹤、活細胞成像、蛋白互作、3D成像等研究領域發(fā)揮重要作用。

Nanoimager主要技術特點

?? 橫向分辨率<20nm;縱向分辨率<50nm
?? 穩(wěn) 定 性:<1 μm/K的漂移;<1 nm (1 Hz to 500 Hz)振幅
?? 支持同時雙色成像和順序四色成像
?? 采用1級激光,使用安全

?圖1 Nanoimager 超分辨成像??

Nanoimager采用PALM/dSTORM技術和光激活定位顯微技術 (PALM) ,利用單分子定位算法并結合光學系統(tǒng)艾里斑的形狀,以超高精度(納米量級)獲得熒光分子的中心位置,然后用CCD將其信號進行采集轉化最終得到分辨率為20nm的超分辨圖像。

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Nanoimager主要應用案例

1、單分子FRET??

??FRET是一種兩個熒光分子間非輻射性的能量轉移方式,反映兩者的分子間距(一般在2 – 10 nm的間距發(fā)生)。Nanoimager是世界第一臺用于大視野單分子熒光共振能量轉移(smFRET)的商業(yè)化儀器,其適用于smFRET的關鍵功能包括:同時雙色成像;單分子散射光強度和總體平均的實時分析;視野中數(shù)千個單分子的高通量成像,以及用交替熒光激發(fā) (ALEX) smFRET的功能來定量化學計量與FRET效率。圖2是smFRET用于研究單個DNA霍利迪交叉的動力學。?

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圖2? 用smFRET檢測霍利迪交叉(HJs)的實時構象變化

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2、單分子示蹤?

??Nanoimager可以在兩個通道同時示蹤細胞或者純化物樣品中的單分子 (圖3),并計算擴散系數(shù)。細胞中分子的擴散系數(shù)可以被示蹤,如酶或蛋白可以通過藥物和抗生素的反應來示蹤。低擴散率可以表示標記分子與另一分子或結構的相互作用或相結合。
??Nanoimager可以直接反映純化樣品中熒光粒子的擴散率和預估大小,具有敏感性 (單熒光分子級別) 和特異性 (雙色標記可以顯著降低檢測雜質(zhì)的可能性)。??

?圖3? Nanoimager雙色追蹤單分子/粒子?

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3、更大視野的成像
??Nanoimager的每個成像通道均有50 μm x 80 μm的大視野,且照明均勻,可以實現(xiàn)單分子或細胞的高通量成像并快速收集數(shù)據(jù)。圖4顯示了以10倍于其他技術的速度對突變的大腸桿菌細胞的不同表型進行成像。為了獲得不同表型的可靠的結果,需要對大量細胞進行比較。使用具有大視野,能夠自動對焦和自動獲取數(shù)據(jù)的Nanoimager可以顯著加快整個實驗速度和通量。將大視野與超分辨成像結合是Nanoimager的獨特優(yōu)勢。???

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圖4? Nanoimager的大視野可以在高分辨率下實現(xiàn)高通量成像??

超分辨熒光顯微鏡以其獨特的優(yōu)勢,已成為生物醫(yī)學研究的重要工具。如果您想了解更多關于Nanoimager的技術和應用詳情,歡迎致電010-85120280咨詢,我們會盡快給您滿意的答復!?

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相關產(chǎn)品及鏈接?

1、新一代超分辨熒光顯微鏡 (NEW):、LaVision BioTec光片照明顯微鏡:、雙光子熒光顯微鏡:、LVEM5 臺式透射電子顯微鏡:

 
 
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