雙光子熒光顯微鏡用于熒光細(xì)胞中PH定量圖像

雙光子熒光顯微鏡只能用于熒光圖像，不能用于明場光透射．分辨
率較標(biāo)準(zhǔn)共聚焦低一半．環(huán)境要求較高，室溫18—22攝氏度，潔凈
實(shí)驗(yàn)室1000級(低顆粒含量)，灰塵若多，則易損傷光學(xué)鏡頭．為保
證光學(xué)穩(wěn)定性，應(yīng)采用抗震浮動光學(xué)平臺，故設(shè)備成本高昂，不易
普及．全內(nèi)反射熒光顯微鏡

  很多細(xì)胞質(zhì)變化須在細(xì)胞的有限范圍內(nèi)觀察，如細(xì)胞漿膜．全
內(nèi)反射熒光顯微鏡提供一種非常接近表面的成像方法．當(dāng)激發(fā)光通
過高反射系數(shù)的玻璃到低反射系數(shù)的細(xì)胞，僅觀察到超過一定反射
角度的反射光。
  進(jìn)入低反射系數(shù)細(xì)胞的激發(fā)光迅速衰減，激發(fā)光僅深入到距細(xì)
胞表面100 nm．因此，僅觀察到細(xì)胞膜熒光圖像．采用TIRFM已獲
得單個活細(xì)胞中細(xì)胞膜上單分子圖像
  用熒光染料Cy3標(biāo)記人表皮細(xì)胞(A431)的表皮生長因子(EGF)，
EGF是小肽激素，可誘導(dǎo)細(xì)胞增殖．
  熒光壽命圖像顯微鏡
  熒光壽命圖像顯微鏡(FLIM)已用于活細(xì)胞中pH定量圖像c42)，
應(yīng)用于活細(xì)胞中酶活性成像．也可以檢測活細(xì)胞中多種熒光染料如
綠色熒光蛋白變異體．FLIM分辨率有限，技術(shù)上要求十分嚴(yán)格及復(fù)
雜的數(shù)學(xué)處理，對其前景并不看好．

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