微粒體細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)透射式電子顯微鏡

常用于細(xì)胞特異物質(zhì)(如抗原)的定位，方法是將細(xì)胞與鐵蛋白標(biāo)記
的抗體共同孵育，然后經(jīng)染色、包埋、超薄切片，在透射電鏡下鐵
蛋白形成高電子密度顆粒，可以精確地、特異性地顯示出相應(yīng)抗原
的部位、分布。用鐵蛋白標(biāo)記配體，還可研究、顯示膜受體。但由
于鐵標(biāo)記較單一，現(xiàn)已不常用。在金屬標(biāo)記中現(xiàn)用得較多的是膠體
金標(biāo)記。膠體金標(biāo)記技術(shù)是顯示細(xì)胞中某種特殊物質(zhì)結(jié)構(gòu)的技術(shù)，
膠體金為一種帶負(fù)電荷的疏水膠體溶液，由吸附的周圍離子云維持
膠體的穩(wěn)定性。膠體金標(biāo)記有直接法和問接法兩種，直接法是金標(biāo)
記物直接標(biāo)記細(xì)胞結(jié)構(gòu)；間接法是標(biāo)本先用第一抗體血清處理后，
再用金標(biāo)蛋白A或金標(biāo)第二抗血清處理。蛋白A(protein A)是從金
黃色葡萄球菌分離出來的一種蛋白質(zhì)，具有結(jié)合免疫球蛋白的功能
。膠體金標(biāo)記可用于光鏡，也可用于電鏡，包括透射式電鏡和掃描
電鏡。

  細(xì)胞離體成分的分析是將細(xì)胞破碎，取其某種細(xì)胞器或針對(duì)某
一化學(xué)成分進(jìn)行分析。例如，破碎細(xì)胞通過梯度離心分離線粒體，
在體外可測(cè)定ATP的合成及分解功能。細(xì)胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)經(jīng)分離出細(xì)
胞后可形成囊泡，稱為微粒體，其中包括各種酶成分，對(duì)這些酶成
分的分析有利于對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能的研究。對(duì)細(xì)胞化學(xué)成分的分析方法
很多，如蛋白質(zhì)分析就有層析法、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳等。層
析法又有多種，常用的有柱層析，方法是使蛋白質(zhì)混合液通過含有
多孔固體基質(zhì)的柱，不同的蛋白質(zhì)與基質(zhì)相互作用而被不同程度的
滯留，當(dāng)其從柱底流出時(shí)，即可被分別收集。選擇不同的基質(zhì)，就
可根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷、分子量大小或特殊化學(xué)基團(tuán)的結(jié)合力而分離
出不同生物活性的蛋白質(zhì)。sDS聚丙烯酰胺凝膠電泳是一種常用的
方法，SDS為帶負(fù)電荷的去垢劑，即十二烷基硫酸鈉。它可以使蛋
白質(zhì)展開成為伸展的多肽鏈，并與其他蛋白質(zhì)或脂質(zhì)失去聯(lián)系。這
樣在聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳，就可使復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物被分
離成一系列按分子量大小依次排列的區(qū)帶，很容易進(jìn)行鑒別分析。

細(xì)胞器的分離和提純是為了更好地研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的化學(xué)組成和
生命活動(dòng)。細(xì)胞器的分離常采用差速離心法，即首先將細(xì)胞破碎，
然后在低溫和適當(dāng)pH條件下用不同轉(zhuǎn)速的離心機(jī)將細(xì)胞的各種成分
分開。如低速(1000r／min)短時(shí)間(15min)離心可首先將較大的細(xì)
胞核沉淀下來，用高速(8000～25000r／min)離心可使次大的線粒
體分離，再用超速(25000～8500°F／min)離心，可收集溶酶體等
封閉小泡以及核糖體。差速離心不易得到純凈的細(xì)胞器和組分，其
中?；煊心ず鸵恍╊w粒結(jié)構(gòu)。

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