光學(xué)顯微鏡-不同的化合物染色來(lái)增強(qiáng)對(duì)比度
 
  早期使用顯微鏡觀察的樣品通常是活的，或者說(shuō)至少短時(shí)間是
活的。固定和染色技術(shù)隨著顯微鏡的進(jìn)步而發(fā)展。由于顯微鏡光學(xué)
的改進(jìn)，光學(xué)系統(tǒng)的局限性確定了樣品制備的必要性。顯微鏡研究
者根據(jù)光學(xué)的局限性作出了適當(dāng)?shù)淖尣健７糯?、?shù)值孔徑值、分變
率限度、工作距離和色彩偏差糾正被認(rèn)作為相關(guān)因素。另外，各種
照明方法包括亮視野、暗視野、相差和熒光相繼被引入主流顯微鏡
。隨著這些類(lèi)型顯微鏡的利用，人們接受了這樣一個(gè)事實(shí)：即樣品
需要制備成能滿足顯微鏡光學(xué)局限的要求。通常大多數(shù)這些的制備
需要固定樣品。

  用相機(jī)與顯微鏡結(jié)合使用來(lái)證實(shí)影像。常規(guī)的膠片照相顯微鏡
適用于大多數(shù)亮視野、暗視野和熒光顯像，因?yàn)槠毓鈺r(shí)間易于滿足
。在有必需特殊設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室將活細(xì)胞制成膠片，這些膠片的大多
數(shù)使用亮視野方式制成，因?yàn)槟z片的顯影需要較大光強(qiáng)度，由于染
料的毒性和長(zhǎng)時(shí)間曝光的光毒作用，不可能制成活細(xì)胞熒光膠片。
  雖然與存活樣品相比，固定的細(xì)胞產(chǎn)生的信息較少，但也有一
些優(yōu)點(diǎn)。固定的細(xì)胞更扁平，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，它們不能運(yùn)動(dòng)，也不
需要持續(xù)的飼養(yǎng)，能用不同的化合物染色來(lái)選擇性地增強(qiáng)對(duì)比度。
大多數(shù)抗褪色溶劑與固定細(xì)胞(但不是活細(xì)胞)是相容的
  當(dāng)活細(xì)胞的影像被記錄在常規(guī)膠片上時(shí)，顯微鏡工作者被膠片
的敏感度和分辨率所限定，同時(shí)也限定了實(shí)驗(yàn)的種類(lèi)。，當(dāng)與現(xiàn)代
的、增強(qiáng)的或冷的電荷偶聯(lián)裝置(ch辨coupled device，CCD)攝像
機(jī)和光電倍增管掃描技術(shù)相比時(shí)，膠片有許多局限性。因此，早期
活細(xì)胞池受到了相關(guān)技術(shù)固有地限定。早期的顯微鏡并沒(méi)有現(xiàn)代顯
微鏡的圖像對(duì)比

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