細(xì)胞懸液培養(yǎng)可分為兩類:?jiǎn)螌蛹?xì)胞培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)
細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法:首先用0.1克分子量的枸櫞酸溶液,使細(xì)胞核
與細(xì)胞質(zhì)分離,然后再用O.1%結(jié)晶紫溶液,使細(xì)胞核染色,將已
染色的細(xì)胞用生理鹽水作定量稀釋,并注入細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。
也可采用不染色直接注入細(xì)胞計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)。為了增加計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確
性,計(jì)數(shù)前必須攪動(dòng)懸液菠細(xì)胞分布均勻;在懸液注入計(jì)數(shù)器時(shí),
不要用力太大,只須從吸管中輕輕地?cái)D出一滴懸液,依靠毛潮管的
吸力,使懸液流入計(jì)數(shù)器。計(jì)數(shù)時(shí),在低倍顯微鏡下數(shù)出四焦姻天
誨中的細(xì)胞數(shù),僅計(jì)算有胞漿和胞核的完整細(xì)胞數(shù),根據(jù)以下方程
式,算出每毫升懸液中的細(xì)胞數(shù)
如果稀釋細(xì)胞的懸液并非l毫升,只須將細(xì)胞數(shù)/毫升再乘以
懸液毫升數(shù),即得懸液中的細(xì)胞總數(shù)。
由于染色的細(xì)胞核看起來比較清楚,而且可以區(qū)別出正常健康
的細(xì)胞核和早期壞死階段的細(xì)胞核,為了計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,還是采用
染色計(jì)數(shù)的方法為好。(近代電子細(xì)胞計(jì)數(shù)器已逐步代替了細(xì)胞計(jì)
數(shù)器的計(jì)數(shù)方法)。
懸液培養(yǎng)法
細(xì)胞懸液培養(yǎng)法可分為兩類:一類是單層細(xì)胞培養(yǎng),或稱定量
培養(yǎng)。細(xì)胞在這種培養(yǎng)里雖然是用懸液狀態(tài)接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),但接
種后細(xì)胞立即沉入瓶底,固著干玻璃底面進(jìn)行增殖。因此,這種培
養(yǎng)實(shí)際上還是一種靜止?fàn)顟B(tài)的培養(yǎng)。另一類是懸浮培養(yǎng),它是一種
活動(dòng)狀態(tài)的培養(yǎng),即通過一種特殊的裝置,使懸液不停地滾動(dòng),細(xì)
胞在培養(yǎng)液中始終保持懸浮的狀態(tài)。這種培養(yǎng)法可使細(xì)胞大量的繁
殖,獲得大量的細(xì)胞。今僅介紹單層細(xì)胞培養(yǎng)法。
單層細(xì)胞培養(yǎng):?jiǎn)螌蛹?xì)胞培養(yǎng),多用于不同實(shí)驗(yàn)條件下細(xì)胞的
定量測(cè)定和病毒的研究上。
單層細(xì)胞培養(yǎng),其細(xì)胞的來源有兩種,一種可先通過母培養(yǎng),
即先經(jīng)過組織塊的培養(yǎng)而獲得細(xì)胞懸液,再進(jìn)行單層細(xì)胞培養(yǎng)。另
一種來源是利用胰蛋白酶或其他酶的消化作用,直接把新鮮組織的
細(xì)胞間質(zhì)破壞,使細(xì)胞分散成游離細(xì)胞,再制成細(xì)胞懸液進(jìn)行單層
細(xì)胞培養(yǎng)。一般經(jīng)過母培養(yǎng)的方法比較容易成功,而用組織直接消
化的方法是比較難以成功的。今以免腎為側(cè),說明單層細(xì)施培養(yǎng)的
過程。
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