應(yīng)用圖像顯微鏡觀察青霉等屬產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)載片培養(yǎng)技術(shù)

載片培養(yǎng)技術(shù)  在離體觀察時(shí)常用。利用此技術(shù)，真菌能在玻片上
萌發(fā)、生長(zhǎng)，因此可觀察到各個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期的結(jié)構(gòu)特征。這種方法是在載
玻片和蓋玻片中間夾上瓊脂培養(yǎng)基，真菌在這種濕的空間里生長(zhǎng)發(fā)育。
具體做法如下：

(1)在無(wú)菌培養(yǎng)皿中，制備適合真菌生長(zhǎng)的瓊脂平板，用無(wú)菌刀或
解剖針將凝固的培養(yǎng)基切成1 平方cm的小塊。

(2)在培養(yǎng)皿的底部鋪上濾紙，再在上面放一彎形玻棒，附上載玻
片和蓋玻片，消毒，然后加入無(wú)菌水使濾紙濕潤(rùn)，為防止玻片上的霧氣
，可配制含5％甘油的無(wú)菌水。

(3)在無(wú)菌條件下放一塊瓊脂培養(yǎng)基在載玻片上。也可將熔融的培
養(yǎng)基用無(wú)菌吸管或移液管移1～2滴到玻片上。

(4)在瓊脂塊四個(gè)邊緣的中央接種孢子或菌絲。

(5)把消毒的蓋玻片的中部蓋在瓊脂培養(yǎng)基上，然后在合適的溫度
和光照條件下培養(yǎng)，濾紙如風(fēng)干應(yīng)補(bǔ)充無(wú)菌水。直至培養(yǎng)基四周開始產(chǎn)
孢。過(guò)早時(shí)尚未長(zhǎng)出產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，而過(guò)晚則蓋玻片上已長(zhǎng)滿孢子，將無(wú)法
看清產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。

(7)在一干凈的載玻片上加一滴乳酚棉藍(lán)，蓋上粘附有真菌生長(zhǎng)物
的蓋玻片，制成半永久玻片，或滴一滴乳酚棉藍(lán)液到培養(yǎng)真菌的載玻片
中央，蓋上干凈的蓋玻片，也可在顯微鏡下觀察。制作永久玻片多用0
．1％--0．2％的淡結(jié)晶紫染色。先將載玻片過(guò)酒精燈火焰略加熱，使
產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)附著變牢，再滴加FAA或酒精甲醛固定2分鐘，用濾紙吸干后，
滴上染色液染0．5—1分鐘，然后在自來(lái)水下緩緩沖洗去多余的染料，
晾干后用加拿大樹膠或中性樹膠封成永久玻片。

擬青霉等屬產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)上往往有水散性的分生孢子長(zhǎng)鏈，用以上染色
方法都會(huì)破壞孢子鏈。為此應(yīng)將長(zhǎng)有完整產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)的蓋玻片不染色、不
封片，直接觀察、繪圖或攝影，然后再染色制片。

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