1、簡述 1.1.微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)除另有規(guī)定外均采用平板菌落計(jì)數(shù)法，這是活菌計(jì)數(shù)的方法之一。  2. 設(shè)備要求 2.1.微生物限度檢查應(yīng)有單獨(dú)的無菌室，每個(gè)無菌室應(yīng)有獨(dú)立的凈化空氣系統(tǒng)，應(yīng)在潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，其環(huán)境的潔.凈度為10000級(jí)。檢驗(yàn)全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。 2.2. 陽性菌試驗(yàn)應(yīng)另設(shè)單獨(dú)的凈化工作臺(tái)，不得在供試品檢驗(yàn)用的無菌室內(nèi)或凈化工作臺(tái)上操作。 3. 取樣 3.1. 在各取水口用已滅菌好的封閉的250ml 空三角瓶取水，并將瓶子做上標(biāo)記或貼上標(biāo)簽，標(biāo)明日期和取樣點(diǎn)名稱。 3.2. 取樣前洗手并消毒。 3.3. 將取樣閥消毒。 3.4. 打開閥門，放水3~5分鐘。 3.5. 已滅菌好的封閉的空三角瓶在取水前用75％的酒精棉球擦拭外壁。 3.6. 用待檢測的水淋洗檢驗(yàn)用取樣瓶和瓶塞3次，每取樣點(diǎn)取2瓶,共約1000ml。 3.7. 微生物檢驗(yàn)應(yīng)在取樣后的1h內(nèi)進(jìn)行，否則將樣品冷藏并在4h內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。 3.8. 待檢驗(yàn)的水在檢驗(yàn)之前，應(yīng)保持原包裝狀態(tài)，嚴(yán)禁開啟。包裝已開啟的樣品不得作為供試品。 4. 試驗(yàn)準(zhǔn)備 4.1. 將供試品及所有已滅菌的玻璃器皿經(jīng)傳遞窗移至無菌室內(nèi)。編號(hào)后將全部外包裝（牛皮紙）去掉。 4.2. 開啟紫外殺菌燈后，操作人員用肥皂洗手，進(jìn)入緩沖間，換工作鞋。再用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴無菌衣、帽、口罩、手套。 4.3. 操作前先用乙醇棉球擦手，再用碘狀棉球（也可用乙醇棉球）擦試供試品瓶的開口處周圍，待干后啟封。 5. 細(xì)菌、霉菌計(jì)數(shù) 5.1. 純化水和注射用水均采用薄膜過濾法計(jì)數(shù)。 5.2. 取濾膜孔徑不大于0.45μm，直徑不小于50mm可拆卸的濾器。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行滅菌。使用時(shí)，必須保證濾膜在過濾前后的完整性。 5.3. 過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。每片濾膜的總濾膜不宜過大，以避免濾膜上的微生物受損傷。 5.4. 純化水每張濾膜取相當(dāng)于1ml的水直接過濾；注射用水取至少200ml。用PH7.0無菌氯化納－蛋白胨緩沖液沖洗濾膜。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。濾膜貼于平板上時(shí)不得有空隙或氣泡，否則影響微生物生長。 6. 培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 6.1. 一般細(xì)菌計(jì)數(shù)平板倒置于30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。霉菌計(jì)數(shù)平板倒置于20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。 6.2. 除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng)48小時(shí)，分別在24及48小時(shí)點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一般以48小時(shí)的菌落數(shù)報(bào)告；霉菌培養(yǎng)72小時(shí)，分別在48及72小時(shí)點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一般以72小時(shí)的菌落數(shù)報(bào)告；必要時(shí)，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間至5～7天進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。菌落蔓延生長成片的平板不宜計(jì)數(shù)。 6.3. 若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，肉眼可辨別時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)；若平板生長有鏈狀或片狀、云霧狀菌落，菌落間無明顯界限時(shí)，一條鏈，片作為一個(gè)菌落計(jì)，但若鏈、片上出現(xiàn)性狀與鏈（片）狀菌落不同的可辨菌落時(shí)，仍應(yīng)分別計(jì)數(shù)，若生長蔓延的較大的片狀菌落或花斑樣菌落，其外緣有若干性狀相似的單個(gè)菌落，一般不宜作為計(jì)數(shù)用。 6.4. 一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計(jì)數(shù)；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌計(jì)數(shù)。在特殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細(xì)菌，則應(yīng)分別點(diǎn)計(jì)霉菌、細(xì)菌菌落數(shù)。然后將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌數(shù)或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)，與玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基中的霉菌數(shù)或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的細(xì)菌數(shù)進(jìn)行比較，以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌數(shù)為計(jì)數(shù)結(jié)果。 本文由和泰儀器發(fā)布，未經(jīng)允許，禁止轉(zhuǎn)載、抄襲！部分內(nèi)容整理摘編自網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán),請聯(lián)系改正！  上海和泰儀器有限公司   2019-3-18