使用膜濾器過濾細胞培養(yǎng)的溶液中沉淀物-細胞實驗

溶液的過濾除菌
許多用于細胞培養(yǎng)的溶液中含有一種或多種對熱不穩(wěn)定的成分(如
抗生素)，或幾種成分構成的體系(如磷酸鹽緩沖體系)，如果將它們進
行高壓蒸汽消毒，則會生成有毒的沉淀物。因此，使用膜濾器對這些溶
液進行冷消毒是最普遍的方法。

0．2μm微孔濾膜適于一般情況滅菌；然而，一些環(huán)境應激細菌(如
假單胞菌屬SP．)及支原體就能夠通過這類濾膜。為了能最大限度地去
除這些組織培養(yǎng)中常見的微生物污染，就要采用孔徑為o．1灶m微孔濾
膜過濾培養(yǎng)液和血清。濾膜制造商可提供不同類型的濾膜。就細胞培養(yǎng)
而言，醋酸纖維素或硝酸纖維素濾膜通常用于過濾諸如培養(yǎng)液和緩沖液
等液體。值得注意的是，在使用前應該用熱的去離子水沖洗薄膜，清除
其中可能引起細胞毒性的可溶性物質。尼龍膜含較少的表面活化劑或潤
濕劑等可溶性物質；聚乙烯磺酸膜中含少量的可溶性物質并很少與蛋白
質結合。

預先除菌的、隨時可用的一次性過濾系統(tǒng)省時省力，消除了早期過
濾方法存在的隱患。過濾器范圍廣，從小(≤lOml)到大(≥20L)，體積
不等。這種一次性的系統(tǒng)也適用于真空或正壓過濾。許多生產(chǎn)商根據(jù)細
胞培養(yǎng)的使用要求，設計出特殊的過濾系統(tǒng)：滅菌膜、濾套和接收瓶，
并確保它們無細胞毒、無致熱原。對于制備培養(yǎng)基，使用無細胞毒的醋
酸／硝酸纖維素濾膜，或其他相似的濾膜，以及食品級硅管。

注意：所有程序均遵循無茵技術。

  適于哺乳動物細胞的培養(yǎng)基

進行體外哺乳動物的細胞培養(yǎng)，其要點之一是在培養(yǎng)器皿中營造一
種生理環(huán)境和特殊細胞類型的特異性反應。液態(tài)培養(yǎng)基至少要為細胞提
供生長所需的營養(yǎng)物質、能量、恒定的pH和適當?shù)臐B透壓。此外，培養(yǎng)
的外環(huán)境，尤其隔水式COz培養(yǎng)箱，一定要達到穩(wěn)定的溫度和濕度，以
防培養(yǎng)液蒸發(fā)，還要供給呼吸所需的02和維持培養(yǎng)液中碳酸氫鹽緩沖系
統(tǒng)的C02。目前普遍使用的培養(yǎng)基一般由兩部分組成：基礎營養(yǎng)和補充
成分。它們的組成可有相當大的差別。無論怎樣，完全培養(yǎng)基的這兩組
成分都是細胞存活和增殖所不可缺少的。

注意：用于細胞培養(yǎng)的所有溶液和培養(yǎng)液，均應使用反向滲透系統(tǒng)
生產(chǎn)的純凈水配制；用后的培養(yǎng)器皿要用水沖洗，不要用消毒劑處理。

注意：所有與活細胞接觸的試劑與器械一定要滅茵，同時采用相應
的無菌技術。

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