利用計數(shù)板和電子計數(shù)器計數(shù)細胞-微生物計量圖像顯微鏡
利用計數(shù)板和電子計數(shù)器進行直接計數(shù)不能區(qū)分死活細胞,根
據(jù)活細胞能進行生長繁殖這一特點,人們設計了許多活菌計數(shù)方法
。一般是將適當稀釋的樣品涂布在瓊脂培養(yǎng)基表面,培養(yǎng)后活細胞
能形成清晰的菌落,通過計算菌落數(shù)就可知道樣品中的活菌數(shù)。若
使用專門的菌落計數(shù)器,計數(shù)結(jié)果會更精確。平板涂布和傾倒平板
均可用于活菌計數(shù)。
平板計數(shù)簡單、靈敏,廣泛應用于食品、水體及土壤樣品中活
的細菌和其他微生物的計數(shù),但計數(shù)結(jié)果也受一些因素的影響。若
樣品中細胞聚集成團,沒有有效地分散,就會導致計數(shù)結(jié)果偏低,
由于不可能絕對保證每個菌落來源于一個細胞,平板計數(shù)法得到的
結(jié)果稱為菌落形成單位,CFU并不完全等同于樣品中的活菌數(shù)。在
平板計數(shù)過程中,樣品的稀釋度控制在使每個平板上菌落數(shù)在30-3
00個范圍內(nèi)時,能得到最好的結(jié)果。當然,若使用的培養(yǎng)基不能滿
足樣品中所有微生物各自的營養(yǎng)需求,計數(shù)結(jié)果也會偏低。在使用
傾倒平板技術進行活菌計數(shù)時,若溶化的瓊脂培養(yǎng)基溫度過高,會
殺死或損傷一些對溫度較為敏感的細胞,因此乎板涂布技術所得的
計數(shù)結(jié)果有時會高于由傾倒平板法獲得的結(jié)果。涂布平板和傾倒平
板技術
微生物數(shù)量還可由濾膜培養(yǎng)法獲得,首先使樣品濾過一種特制
的,孔徑小于細菌個體的濾膜(membranefilter),然后將濾膜置于
培養(yǎng)基上或浸潤有液體培養(yǎng)基的墊狀物上培養(yǎng),通過計算在濾膜上
形成的菌落數(shù)就可知樣品中的活菌數(shù)
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