色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。
流動(dòng)相因素
1.流動(dòng)相pH
不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無(wú)定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg L-1，且在pH1～9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量，考慮到溶解速度的影響,對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料,其所能承受的流動(dòng)相pH范圍約為1～8。鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對(duì)流動(dòng)相的適應(yīng)范圍大大增加，如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18(十八烷基硅烷鍵合硅膠)，其pH適用范圍可達(dá)2～10。當(dāng)流動(dòng)相pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相易發(fā)生水解而流失；當(dāng)流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí)，會(huì)加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng)，特別是在溫度較高（ 40℃）的環(huán)境下，會(huì)使柱效迅速降低而報(bào)廢。
2.流動(dòng)相變質(zhì)
當(dāng)前使用較為廣泛的是硅基鍵合相填料，當(dāng)以水溶液作為流動(dòng)相或流動(dòng)相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時(shí)，水溶液中或緩沖鹽溶液中會(huì)滋生出一些細(xì)菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對(duì)于多元自動(dòng)比例混合的高效液相色譜儀來(lái)說(shuō),水相或緩沖鹽相獨(dú)立存貯，因存放時(shí)間較長(zhǎng)而容易發(fā)生此類問(wèn)題。
3.流動(dòng)相純度
目前，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10 m,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會(huì)有大量的流動(dòng)相通過(guò),如流動(dòng)相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,引起柱壓升高而無(wú)法正常使用。
4.其它因素
如，流動(dòng)相的極性對(duì)柱子也有一定影響，甲醇、水、冰醋酸等極性較大的物質(zhì)會(huì)破壞硅膠填料柱，正丁醇、二氯甲烷等極性小的物質(zhì)會(huì)破壞化學(xué)鍵合硅膠柱，堿性溶液會(huì)破壞陽(yáng)離子交換樹脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。