應(yīng)用簡介

本實驗采用固相萃取結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)熒光檢測器（SPE-HPLC) 的方法，建立了香油中苯并芘殘留量的檢測方法。香油經(jīng)正己烷溶解，Cleanert Silica和Cleanert BAP-3固相萃取柱凈化，Venusil ASB C18色譜柱（4.6 250 mm，5 m，150 ）分離，水和乙腈為流動相進行等度洗脫，外標法進行定量。結(jié)果表明，苯并芘添加量為0.1 mg/kg時，回收率在80% ~ 100%之間，能夠滿足檢測要求。 應(yīng)用編號：AF10098

苯并芘又稱苯并（ ）芘，英文縮寫B(tài)aP，是一種常見的高活性間接致癌物和突變原。BaP存在于煤焦油、各類炭黑和煤、及焦化、煉油，瀝青、塑料等工業(yè)污水中。肉和魚中的BaP含量取決于烹調(diào)方法，水果、蔬菜和糧食中的BaP含量取決其來源。主要來自洗刷大氣的雨水水中的BaP以吸附于某些顆粒上、溶解于水中和呈膠體狀態(tài)等三種形式存在，其中大部分吸附在顆粒物質(zhì)上。BaP被認為是高活性致癌劑，但并非直接致癌物，必須經(jīng)細胞微粒體中的混合功能氧化酶激活才具有致癌性。BaP不僅廣泛存在于環(huán)境中，而且與其它多環(huán)芳烴的含量不一定的相關(guān)性，長期生活在含BaP的空氣環(huán)境中會造成慢性中毒。許多國家的動物實驗證明，BaP具有致癌、致畸、致突變性。危險特性，遇明火、高熱可燃。受高熱分解放出有毒的氣體因此通過有效的實驗技術(shù)手段，對香油中的有關(guān)苯并芘殘留進行監(jiān)控，以確保消費者對食品消費的安全具有重要意義。

本實驗通過優(yōu)化前處理方法建立了苯并芘在香油中的高效液相色譜方法。

實驗部分

儀器、試劑與材料

主要儀器設(shè)備

高效液相色譜儀（配熒光檢測器）

試劑材料

正己烷、二氯甲烷、乙腈均為色譜純；實驗用水為超純水；苯并芘標準品（純度99%）；一次性無菌注射器；針式過濾器PTFE(0.22 m，直徑13 mm)；

Cleanert Silica固相萃取柱柱：500 mg/6 mL（貨號：SI5006）；Cleanert BAP-3固相萃取柱柱：500 mg/6 mL （貨號：Bap5006）

樣品制備

樣品處理

稱取香油0.5 g，置于12 mL樣品瓶中，加入3 mL正己烷，渦旋震蕩溶解，作為待凈化液。

樣品凈化

取Cleanert BAP-3萃取柱(500 mg/6 mL)，需在柱上串聯(lián)一只Cleanert Silica固相萃取柱，依次用5 mL二氯甲烷，5 mL正己烷活化小柱；將上述待凈化液上樣到小柱上，然后用2 mL正己烷潤洗樣品瓶，將潤洗液也上樣到柱上，先用5 mL正己烷淋洗串聯(lián)柱，待溶液完全滴至Cleanert BAP-3上，將Silica硅膠柱棄去，再用5 mL正己烷淋洗Cleanert BAP-3柱，棄去淋洗液；最后用5 mL二氯甲烷洗脫，收集；40℃氮氣吹干洗脫液，用1 mL乙腈溶解定容，超聲10 s，過0.22 m PTFE濾膜后進HPLC檢測。

實驗條件：液相條件

色譜柱：Venusil ASB C18，5 m，150 ，4.6 250 mm

流動相：水︰乙腈= 12︰88

柱  溫：30℃

進樣量：20 L

流  速：1.0 mL/min

發(fā)射波長：406 nm；激發(fā)波長：384 nm

結(jié)果與討論

由表1可知，采用固相萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測苯并芘的加標回收率在80% ~100%之間，CV值小于10%，能夠滿足檢測要求。由圖可看出經(jīng)Cleanert Silica串聯(lián)Cleanert BAP-3柱凈化，采用Venusil ASB C18色譜柱檢測得到的苯并芘峰形良好，且保留時間穩(wěn)定。

實驗結(jié)果

表1. 香油中苯并芘實驗結(jié)果

物質(zhì)名稱

加標量/(mg/kg)

平均回收率/%

CV/%

RT/min

苯并芘

0.1

90.2

2.2

8.41

結(jié)論

本實驗建立了香油中苯并芘殘留量的前處理方法，并結(jié)合高效液相色譜對香油中苯并芘的殘留量進行了測定。對于加標量為0.1 mg/kg的樣品進行了檢測，回收率在80% ~ 100%之間，符合要求。

附：相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱

規(guī)格描述

包裝數(shù)量

訂貨號

Venusil ASB C18

5 m，150 ，4.6 250mm

1支

VS952505-0

Cleanert BAP-3

500mg/6mL

30支/pk

Bap5006

Cleanert Silica

500mg/6mL

30支/包

SI5006

保護柱套

適用于4.6*10mm和2.1*10mm

1支

SH-100

直聯(lián)式保護柱芯

5 m，150 ；4.6*10mm

4支/包

VS950105-0S

1.5 mL樣品瓶

短螺紋透明帶書寫處 32*11.6mm

100/pk

1109-0519

1.5 mL樣品瓶蓋

9mm中心孔藍蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊 45 Shore A; 1.0mm

100/pk

0915-1819

針式過濾器PTFE

單膜，13mm，0.22 m

100個/包

AS041320-T

一次性注射器

2 mL無針頭

100支/包

LZSQ-2ML

正己烷

4 L/瓶，色譜純

4 4 L/箱

AH216-4

二氯甲烷

4 L/瓶，色譜純

4 4 L/箱

AH300-4

乙腈

4 L/瓶，色譜純

4 4 L/箱

AH015-4

SPE-M08正壓型多功能固相萃取裝置

8 通道

1 臺

SPE-M08

15位氮吹儀

15位

1 臺

NV15-M