政策標(biāo)準(zhǔn)近日，為貫徹《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法》，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，提高生態(tài)環(huán)境管理水平，規(guī)范生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)工作，生態(tài)環(huán)境部制定了《水質(zhì) 滅菌指示微生物(枯草芽孢桿菌黑色變種)的鑒定 生物學(xué)檢測(cè)法》。目前，標(biāo)準(zhǔn)編制單位已完成征求意見(jiàn)稿。按照《國(guó)家環(huán)境保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作管理規(guī)定》(國(guó)環(huán)規(guī)科技〔2017〕1號(hào))要求，現(xiàn)面向全社會(huì)公開(kāi)征求意見(jiàn)，請(qǐng)業(yè)內(nèi)人士認(rèn)真研究并提出書(shū)面意見(jiàn)，于2020年4月30日前通過(guò)信函或電子郵件的方式將意見(jiàn)反饋至生態(tài)環(huán)境部，逾期未反饋的按無(wú)意見(jiàn)處理。
 　　據(jù)了解，枯草芽孢桿菌黑色變種由美國(guó)的 Elizabeth 最先分離得到，因其在含酪氨酸的培養(yǎng)基上產(chǎn)棕黑色素而得名，其作為枯草芽孢桿菌亞種，本身不具有危害性，因能產(chǎn)生對(duì)熱、紫外線、電離輻射和某些化學(xué)物質(zhì)很強(qiáng)抗性的芽孢，可以作為消毒劑檢測(cè)及滅菌質(zhì)量控制方面的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行應(yīng)用。此外，枯草芽孢桿菌黑色變種也可作為炭疽桿菌的非致病性替代物，用于軍事等方面研究；用于生產(chǎn)生物表面活性劑，在環(huán)境保護(hù)、有機(jī)物質(zhì)處理和油回收等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用；用于芽孢形成、萌發(fā)、耐熱機(jī)理等研究領(lǐng)域。因此，制定上述新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)水環(huán)境衛(wèi)生安全的監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)具有重要意義。
 　　《水質(zhì) 滅菌指示微生物(枯草芽孢桿菌黑色變種)的鑒定 生物學(xué)檢測(cè)法》規(guī)定了鑒定水中滅菌指示微生物的生物學(xué)檢測(cè)方法，適用于經(jīng)滅菌處置的廢水中指示微生物(枯草芽孢桿菌黑色變種)的鑒定。標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容框架包括：適用范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、方法原理、干擾和消除、試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品、分析步驟、結(jié)果與報(bào)告、特異性和穩(wěn)定性、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制、廢物處理等。
 　　生物學(xué)檢測(cè)法的方法原理為：滅菌處置后的廢水通過(guò)孔徑為0.45μm 的濾膜過(guò)濾，細(xì)菌和芽孢被截留在濾膜上，然后將濾膜置于酪氨酸選擇性培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)72 h～96h，枯草芽孢桿菌黑色變種產(chǎn)生的酪氨酸酶可分解利用酪氨酸形成黑色素，產(chǎn)生黑色的特征菌落。對(duì)特征菌落進(jìn)行染色鏡檢和生化試驗(yàn)做進(jìn)一步鑒定，枯草芽孢桿菌黑色變種為革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞呈桿狀，單個(gè)或呈短鏈狀排列，芽孢橢圓形，中生，不膨大，能利用甘油、甘露糖，還原硝酸鹽，水解淀粉，不能利用苦杏仁苷、甘露醇。根據(jù)結(jié)果報(bào)告檢出或未檢出枯草芽孢桿菌黑色變種。
 　　在檢測(cè)過(guò)程中，需要的試劑和材料包括酪氨酸瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、淀粉培養(yǎng)基、硝酸鹽培養(yǎng)基、甘油復(fù)紅肉湯培養(yǎng)基、甘露糖生化培養(yǎng)基、甘露醇生化培養(yǎng)基、苦杏仁苷生化培養(yǎng)基、革蘭氏染色液、芽孢染色液、硫代硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、硫代硫酸鈉溶液、無(wú)菌濾膜、無(wú)菌水等。實(shí)驗(yàn)用的儀器和設(shè)備包括采樣瓶、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、pH 計(jì)、顯微鏡、分析天平、培養(yǎng)皿、過(guò)濾裝置、移液管、三角瓶、酒精燈以及無(wú)菌室或超凈工作臺(tái)、生物安全柜等無(wú)菌操作設(shè)備。
 　　在樣品采集方面，標(biāo)準(zhǔn)指出，如果采集的是含有活性氯的樣品，需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液，以除去活性氯對(duì)細(xì)菌的抑制作用(每125 ml 容積加入 0.1 ml 的硫代硫酸鈉溶液)；如果采集的是重金屬離子含量較高的樣品，則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液，以消除干擾(每125 ml容積加入0.3 ml 的乙二胺四乙酸二鈉溶液)。在樣品保存方面，標(biāo)準(zhǔn)明確，采樣后應(yīng)在2h內(nèi)檢測(cè)，否則，應(yīng)10℃以下冷藏但不得超過(guò)6h。實(shí)驗(yàn)室接樣后，不能立即開(kāi)展檢測(cè)的，將樣品于4℃以下冷藏并在2h內(nèi)檢測(cè)。
 　　值得注意的是，在檢測(cè)過(guò)程中，工作人員操作時(shí)應(yīng)按要求佩戴防護(hù)器具，做好無(wú)菌防護(hù)；實(shí)驗(yàn)室操作需在無(wú)菌操作設(shè)備內(nèi)進(jìn)行，避免吸入呼吸道或接觸皮膚和衣物。
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 　　《水質(zhì) 滅菌指示微生物(枯草芽孢桿菌黑色變種)的鑒定 生物學(xué)檢測(cè)法》(征求意見(jiàn)稿)相關(guān)材料