摘要

由美國(guó)藥物濫用與精神健康服務(wù)管理局（SAMHSA）頒布，于2010 年10 月生效的新準(zhǔn)則，允許在政府認(rèn)證的藥物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室采用LC/MS/MS 法確認(rèn)初步藥物測(cè)試結(jié)果。由于LC/MS/MS 法不需要衍生步驟，因此它遠(yuǎn)比以前應(yīng)用的GC/MS 法要簡(jiǎn)便的多。我們提出了一種滿足最新SAMHSA 準(zhǔn)則要求的5 種苯丙胺類藥物的分析方法，并對(duì)其線性、檢測(cè)限（LOD）、準(zhǔn)確度和精密度進(jìn)行論證，還對(duì)該方法的基質(zhì)效應(yīng)、萃取回收率和總處理效率進(jìn)行了考察。這是涵蓋所有SAMHSA 監(jiān)控藥物類別的一系列六種簡(jiǎn)便檢測(cè)方法之一，該方法主要使用安捷倫產(chǎn)品進(jìn)行分析，包括Agilent Bond Elut Plexa PCX 混合模式聚合物SPE 吸附劑，Agilent Poroshell 120 EC-C18，2.7μm 表面多孔LC 色譜柱，Agilent 1200 Infinity LC 系統(tǒng)以及應(yīng)用安捷倫噴射流技術(shù)（AJST）增強(qiáng)電噴霧離子源的Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 系統(tǒng)。

前言

苯丙胺類藥物屬于擬交感神經(jīng)胺類化合物，是很強(qiáng)的神經(jīng)興奮劑，其功效和作用類似于內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)，如腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴胺。苯丙胺類成分是在草麻黃葉子中發(fā)現(xiàn)的（例如麻黃堿），并且于19 世紀(jì)末第一次被合成出來。它們化學(xué)結(jié)構(gòu)的特征是具有一個(gè)苯乙胺骨架，α碳上連著一個(gè)甲基，還有其它的一些取代基團(tuán)。很大一部分苯丙胺類化合物以原型藥物形式從尿液中排出。通過去甲基化作用，較復(fù)雜的苯丙胺類衍生物被代謝為較簡(jiǎn)單的結(jié)構(gòu)，例如甲基苯丙胺代謝為苯丙胺，MDMA 代謝為MDA。除了苯丙胺類藥物，還有許多其它種類的藥物會(huì)在人體內(nèi)代謝成甲基苯丙胺和苯丙胺類物質(zhì)，這就是所謂的苯丙胺類生成藥物或苯丙胺前體化合物，例如安非他尼、氯芐苯丙胺、芬乙茶堿和丙炔苯丙胺等。2011 版的SAMHSA 準(zhǔn)則要求對(duì)5 種苯丙胺類藥物進(jìn)行篩選并確認(rèn)，分別是苯丙胺、甲基苯丙胺、MDA、MDMA 和MDEA。所用分析方法應(yīng)具備使這些藥物與其結(jié)構(gòu)類似物相區(qū)分的能力，以確保避免潛在的干擾，這些干擾物包括麻黃堿、偽麻黃堿、芬特明和苯丙醇胺（即PPA 或去甲麻黃堿）等。

在檢測(cè)苯丙胺類藥物的傳統(tǒng)GC/MS 法中，通常用高碘酸預(yù)處理來氧化羥基苯乙胺類成分如麻黃堿和偽麻黃堿，以排除此類化合物的干擾。我們?nèi)∠诉@一步驟，而是依據(jù)最新SAMHSA 準(zhǔn)則中所要求的對(duì)所有目標(biāo)分析物實(shí)現(xiàn)了可靠的色譜分離。新的SAMHSA 準(zhǔn)則規(guī)定苯丙胺類藥物的最高限量濃度為 250 ng/mL，檢測(cè)限為限量濃度的10%，即25 ng/mL。由于預(yù)計(jì)在一些尿樣中可能出現(xiàn)高濃度苯丙胺類藥物（如同阿片類藥物），我們選擇使用更高容量的3 mm id Agilent Poroshell 120 色譜柱 代替所有以前安捷倫SAMHSA 方法中的2 mm id 色譜柱。與亞 2 μm 的UHPLC 色譜柱相比，填充了2.7 μm 表面多孔顆粒的 Poroshell 120 色譜柱具有與其類似的柱效，但其背壓卻減少了 40%左右。因此，它甚至允許用戶在耐壓400 bar 的常規(guī)液相色譜系統(tǒng)上通過使用更高的流速來提高分辨率，同時(shí)縮短分析時(shí)間和再平衡時(shí)間。

由于Agilent Bond Elut Plexa 的獨(dú)特性質(zhì)，本文所描述的提取方法獲得了苯丙胺類藥物極高的回收率，且重復(fù)性好。不像其它聚合物吸附劑，Plexa 顆粒具有無氨基的羥基化表面，避免了蛋白質(zhì)的結(jié)合。從而獲得了最小的離子抑制作用和最高的檢測(cè)靈敏度。高流速和良好重復(fù)性的實(shí)現(xiàn)，主要得益于色譜柱填料的窄粒徑分布，并且不含易引起堵塞的細(xì)顆粒。

在較小的樣品進(jìn)樣體積（2 μL）和無預(yù)富集的條件下，該方法獲得了極好的信噪比（樣品濃度25ng/mL 時(shí) 400:1，該濃度只有 SAMHSA 規(guī)定限量濃度的10%），這得益于應(yīng)用了AJST 技術(shù)的 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 系統(tǒng)電噴霧離子源增強(qiáng)了檢測(cè)靈敏度。

安捷倫以前的分析方法（由Moorman 和Hughes 開發(fā)，2010）采用的是Agilent 6410 Triple Quadrupole LC/MS 系統(tǒng)和其它的 SPE/LC 產(chǎn)品和操作步驟。

結(jié)論

本文所描述的固相萃取樣品制備與LC/MS/MS 檢測(cè)相結(jié)合的分析方法完全遵循SAMHSA 要求，為認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室的藥物測(cè)試或其它有類似要求的分析環(huán)境的測(cè)試提供高精密度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性的有法律效力的數(shù)據(jù)結(jié)果。其硬件配置與2011 版SAMHSA 方法中的相同均來自安捷倫。這些方法特別為安捷倫1100 和安捷倫 1200 LC 系列的所有用戶開發(fā)，這些LC 系統(tǒng)的背壓均不超過 400 bar。采用其它型號(hào)的安捷倫三重四極桿LC/MS 系統(tǒng)應(yīng)用本方法時(shí)，離子源參數(shù)可以很容易地修改。安捷倫科技可提供電子版本的LC/MS/MS 數(shù)據(jù)采集和定量分析方法。