上海圻明生物科技有限公司
SHANGHAI QiMing BIOTECHNOLOGY CO.，LTD.

酪氨酸酶(tyrosinase， TYR ) 試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
酪氨酸酶又稱(chēng)多酚氧化酶，是由 Cu2+與酶蛋白結(jié)合的金屬酶。酪氨酸酶是生物
體合成黑色素的關(guān)鍵酶，也是引起果蔬酶促褐變的主要因素，同時(shí)也對(duì)昆蟲(chóng)的免
疫及生長(zhǎng)有重要影響。
測(cè)定原理： TYR 能夠催化鄰苯二酚反應(yīng)生成鄰苯二醌在 420nm 處有特征吸收峰 。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成：
提取液：液體 100mL 1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑 30mL 1 瓶，4℃避光保存；臨用前加 25ml 蒸餾水溶解，用不完的試劑 4℃避
光保存一周。
粗酶液提?。?br>1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（10 4 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提
取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；
10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，
加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定 步驟和加樣 表：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 420nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 測(cè)定前將試劑一、測(cè)定前將試劑一在 30℃放置 10min 以上。
3、 樣本測(cè)定表
試劑名稱(chēng)（ L） 測(cè)定孔
樣本 500
試劑一 500
4、在 1mL 玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄 420nm 下 10s 時(shí)的
吸光值 A1 和 3min10s 后的吸光值 A2。計(jì)算 A＝A2-A1。
注意：
如果 A 小于 0.005，可將反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)或加大樣本量.
TYR  活性 計(jì)算：
1、血清（漿）TRY 活性
單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A420 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式：
TYR（U/mL）= A V 反總 V 樣 0.01 T =66.7 A

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞 TYR 活性
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A420 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。
TYR（U/mg prot）＝ A V 反總 （V 樣 Cpr） 0.01 T =66.7 A Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A420 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。
TYR(U/g 鮮重）＝ A V 反總 (W V 樣 V 樣總) 0.01 T =66.7 A W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A420 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單
位。
TYR（U/10 4 cell）＝ A V 反總 (500 V 樣 V 樣總) 0.01 T =0.13 A
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.07mL； V 樣：加入樣本體積，0.015mL；V 樣總：加入提取
液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；
500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。

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