使用者針對(duì)所調(diào)配的溶液做吸收度量測(cè),溶液的濃度越高,對(duì)光的吸收率越大。其原理就是利用該溶液對(duì)某些特定波長(zhǎng)光線的吸收程度,推算光吸收率。 光源發(fā)射光後,經(jīng)過光柵,此時(shí)的光強(qiáng)度為I0,通過樣品的光路徑稱為L(zhǎng),光被吸收後的光強(qiáng)度為I,再經(jīng)由偵測(cè)器偵測(cè)及計(jì)算後轉(zhuǎn)換為吸光值,吸收度的公式如下: 吸收度(A)=log(I0/I)=εcl c:樣品濃度 l:光徑長(zhǎng) ε:樣品莫耳吸光係數(shù) 由於光徑長(zhǎng)固定,可視為常數(shù),因此吸光度與吸光物質(zhì)的濃度成正比。
測(cè)量核酸(DNA or RNA)濃度時(shí),可以依據(jù)該核酸樣品對(duì)320nm光波的吸收率來計(jì)算其濃度,通??梢詫憺锳320或OD320。"A"即"Absorbance(吸收度)";"OD"即"optical density(光學(xué)密度)"。 20個(gè)標(biāo)準(zhǔn)胺基酸中,3個(gè)芳香族氨基酸-Phenylalanine、Tyrosine及 Tryptophane,因?yàn)橛斜江h(huán)的構(gòu)造,會(huì)吸收紫外線的光。下圖為相同胺基酸濃度下,波長(zhǎng)280nm 的吸收光譜,由圖可知,Tryptophane吸光強(qiáng)度最強(qiáng),呈現(xiàn)最高的波峰,Tyrosine次之,Phenylalanine吸收程度最差。由於蛋白質(zhì)中大多含有這3種胺基酸,因此大部分的蛋白質(zhì)都會(huì)吸收紫外線。由此特性,波長(zhǎng)280nm 的吸收光譜可作為蛋白質(zhì)的定量分析的一項(xiàng)利器。
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2017 光譜儀、光纖光譜儀、拉曼光譜儀、紅外光譜儀、微型光譜儀生產(chǎn)領(lǐng)導(dǎo)者 - 臺(tái)灣超微光學(xué) OtO Photonics Inc.