核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來(lái)使得樣本核酸提取工作自動(dòng)完成的儀器。其在、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制中心、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。

洗滌目的：

對(duì)于核酸提取過(guò)程而言，洗滌亦是十分重要的步驟。首先必選懸浮起沉淀來(lái)。其次是一定的時(shí)間的控制，特別是如果有比較大的核酸沉淀。其三為多次少量。Z后是要徹底去上清。將上清倒掉之后在吸水紙上倒置片刻是大部分資料中的基本操作。若離心管經(jīng)過(guò)硅化，質(zhì)量好，由于液體幾乎不掛壁，因此能夠非常徹底地去除上清；質(zhì)量好的管子，盡管沒(méi)有經(jīng)過(guò)硅化，只會(huì)有非常少的殘留量，不會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題；差的管子會(huì)出現(xiàn)非常多的液體的掛，有非常多的殘留量，會(huì)對(duì)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。將液體倒掉以后再進(jìn)行短暫離心，用移液器吸出殘液，是使液體殘余得以防止的一個(gè)好方法。

還有必須牢記的是，上一步操作中的雜質(zhì)會(huì)留在殘液中，混勻程度、核酸沉淀的大小決定了其殘留量的多少。雜質(zhì)不能夠通過(guò)揮發(fā)去除，乙醇可以通過(guò)揮發(fā)去除。這個(gè)步驟，用手甩不可以，如果這樣，核酸很容易被甩掉。除此以外，洗滌的強(qiáng)度也取決于裂解液的裂解能力和核酸沉淀的大小。沉淀越大，裂解液就會(huì)有越強(qiáng)的裂解能力。放置相對(duì)比較長(zhǎng)一點(diǎn)的時(shí)間，增加洗滌次數(shù)，就能夠更加徹底的洗滌。當(dāng)然，還有一個(gè)至關(guān)重要的因素為乙醇濃度的選擇，通常情況下，洗滌一定要選用室溫的75%乙醇。

乙醇沉淀法

是乙醇沉淀法是對(duì)于核酸的濃縮得到Z為廣泛應(yīng)用的酸濃縮方法。在中等濃度下存在單價(jià)陽(yáng)離子的時(shí)候，將一定量的乙醇加入之后，能夠通過(guò)離心回收所有形成的核酸沉淀。甚至能夠定量回收低至pg量的DNA或RNA。回收的核酸能夠根據(jù)所需濃度再次在適當(dāng)?shù)木彌_液中溶解。在具體操作核酸濃縮時(shí)，能夠?qū)/10單價(jià)陽(yáng)離子鹽貯存液2V無(wú)水乙醇加入到含樣品的小離心管中，混合均勻，在冰水浴中放置15～30分鐘，取出目測(cè)平衡，0～4攝氏度，12000 ?g，離心10分鐘。吸取去上清，除此以外，再將0.5～1ml乙醇加入，12000 ×g，0～4攝氏度，離心2分鐘。吸取去上清，打開(kāi)蓋子將沉淀晾干或者用油泵將沉淀抽干之后，在適當(dāng)體積的緩沖液中溶解。選擇單價(jià)陽(yáng)離子鹽是主要以下述考慮為基礎(chǔ)，dNTP的共沉淀能夠使用醋酸銨來(lái)減少，然而在之后用來(lái)磷酸化核酸時(shí)，應(yīng)當(dāng)對(duì)醋酸銨避免使用。由于T，多核苷酸激酶的強(qiáng)烈抑制劑有銨離子，由于在乙醇中LiCl有很高的溶解度，因此，當(dāng)使用較高濃度的乙醇沉淀RNA時(shí)一般使用LiCl。醋酸鈉（pH5.2）大多用于DNA和RNA沉淀，NaCl用于含有SDS的核酸樣品。

2005-08-17 933次 熱門(mén)標(biāo)簽： 核酸提取核酸的性質(zhì)和發(fā)展歷史核酸提取過(guò)程核酸的沉淀 上一篇 下一篇