用于和DNA或RNA結(jié)構(gòu)類似的寡核苷酸合成的自動化儀器，即是DNA合成儀。通常用于固相合成法，每次在長的寡核苷酸鏈上接入一個核苷酸。加入每一個核苷酸均通過相同的化學(xué)反應(yīng)和相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。儀器不同，所用化學(xué)反應(yīng)和操作細(xì)節(jié)也會隨之發(fā)生變化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常廣泛的應(yīng)用。

操作步驟

亞磷酰胺DNA合成的試劑：

氨水切除溶液

乙腈清洗溶劑

12氧化混合物

三lv乙酸(TCA)脫保護(hù)溶液

N—甲基咪唑封閉試劑

乙酐

四唑偶聯(lián)催化劑

A、G、C、T亞磷酰胺單體

保護(hù)堿基的5/—DM

以以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例，操作步驟如下：

1、對合成儀上所有試劑瓶中的試劑量認(rèn)真檢。

2、在合成儀上裝上標(biāo)記好的干凈的收集瓶。

3、在合成儀中輸入要合成的DNA序列。

4、對選擇的合成步驟進(jìn)行檢查。

5、選擇結(jié)束方法：儀器的原始狀態(tài)為TritylOffAuto，如果想要通過5，—DMT基團(tuán)連接純化寡核苷酸，那么將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。

6、選擇結(jié)束方法通常是為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。

7、將你所希望的保存名字輸入到每個柱監(jiān)視器的Username下。

8、每一個收集瓶相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記用代碼代替。

9、將每一個柱設(shè)置的詳細(xì)資料打印出來。

10、對打印出來的資料進(jìn)行檢查，判斷是否正確。

11、為了確保合成儀上合成柱處于正確的位置，運(yùn)行StartColumn步驟對每一個柱的位置進(jìn)行檢查。

12、對是否充滿連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)進(jìn)行檢查。

13、保證試管充分清潔干凈，保證DMT廢液管路通向分部收集器。

14、將循環(huán)啟動，運(yùn)行開始程序?qū)υ噭┕苈愤M(jìn)行清洗，將原來的試劑除去。

日常維護(hù)

1．流路節(jié)流閥

應(yīng)該1個月清洗1次節(jié)流閥，以避免阻塞，清洗時，先在水中煮沸15min，然后再在甲醇中超聲波清洗。

2．儲液瓶

需要保持氬氣壓力以及管路清潔。瓶子在亞磷酰胺及儲液瓶位置上放置。

3．瓶塞“O”形環(huán)

至少對“O”形環(huán)一月檢查一次，1年更換1次。比較儀器上的“O”形環(huán)與新的備用“O”形環(huán)，若有白色沉淀出現(xiàn)在“O”形環(huán)上，用棉花蘸取乙腈進(jìn)行清洗。

2005-09-19 1068次 熱門標(biāo)簽： DNA合成儀結(jié)構(gòu) 上一篇 下一篇