細(xì)胞分析儀又叫流式細(xì)胞儀,是以流式細(xì)胞術(shù)為核心技術(shù),集光學(xué)、電子學(xué)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、生物學(xué)、免疫學(xué)以及激光和計(jì)算機(jī)等多門學(xué)科和技術(shù)于一體的先進(jìn)科學(xué)技術(shù)設(shè)備。
細(xì)胞分析儀的原理細(xì)胞分析儀主要用作細(xì)胞分析和細(xì)胞分選。
細(xì)胞分析原理:
將待測(cè)樣品制成單細(xì)胞懸液,經(jīng)特異性熒光染料染色后裝入樣品管,由系統(tǒng)產(chǎn)生一定氣體壓力將樣品管送入流動(dòng)室,細(xì)胞懸液從樣品管射出,樣品管周圍由鞘液包圍。
鞘液管與樣品管成一定角度使得待測(cè)細(xì)胞在鞘液的作用下成單行排列,形成細(xì)胞柱,通過(guò)噴嘴與入射的激光束垂直相交,細(xì)胞或顆粒被激光激發(fā)產(chǎn)生熒光信號(hào)和非熒光散射信號(hào),最終通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)處理后由計(jì)算機(jī)輸出。
由于各細(xì)胞或顆粒的大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)含量、核酸(DNA或RNA)含量等的不同,使得接收到的熒光信號(hào)和非熒光散射信號(hào)也不同,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)不同性質(zhì)的細(xì)胞或群體進(jìn)行分析和分類。
細(xì)胞分選原理:
細(xì)胞分析儀的分選功能是由細(xì)胞分選器來(lái)完成的。在分選過(guò)程中,細(xì)胞分析儀通過(guò)高頻振蕩對(duì)液流施加液滴驅(qū)動(dòng)能量,使其斷離為均勻的液滴,根據(jù)事先確定的分選標(biāo)準(zhǔn)由系統(tǒng)判斷是否將被分選,由充電電路對(duì)選定的細(xì)胞液滴進(jìn)行充電。
當(dāng)帶電液滴通過(guò)電場(chǎng)時(shí),會(huì)在電場(chǎng)的作用下向左或向右偏轉(zhuǎn),具體方向取決于液滴的電荷極性,未帶電荷的液滴不受電場(chǎng)的影響,它們將在中心位置通過(guò),最后進(jìn)入廢液抽吸器,發(fā)生偏轉(zhuǎn)的液滴落入相應(yīng)的收集器中,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分選。
一般來(lái)說(shuō),在進(jìn)行較大或者脆弱細(xì)胞的分選時(shí),為了得到最佳結(jié)果,應(yīng)該使用較大的噴嘴和較低的壓力;在分選較小或者非脆弱細(xì)胞時(shí),如果要增加產(chǎn)量,應(yīng)該使用較小的噴嘴和較高的壓力。
細(xì)胞分析儀的特點(diǎn)細(xì)胞分析儀可以對(duì)不同的單細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測(cè),而且在確保細(xì)胞數(shù)量足夠的前提下,可以在短時(shí)間內(nèi)獲取大量的細(xì)胞,可以同時(shí)檢測(cè)數(shù)百萬(wàn)的細(xì)胞。
細(xì)胞分析儀可以對(duì)單個(gè)細(xì)胞的多種特征進(jìn)行分析,對(duì)單個(gè)細(xì)胞的不同的參數(shù)進(jìn)行分析,借助熒光染色的方式對(duì)單細(xì)胞受體的表達(dá)方式和DNA的含量等進(jìn)行分析,實(shí)現(xiàn)了定量分析和定性分析的結(jié)合。
細(xì)胞分析儀性能的技術(shù)指標(biāo)細(xì)胞分析儀性能的技術(shù)指標(biāo)主要有熒光分辨率、熒光靈敏度、分析參數(shù)多少及分析、分選速度及純度等。
熒光分辨率是指分辨兩個(gè)相鄰峰的最小距離,通常用變異系數(shù)(CV值)來(lái)表示?,F(xiàn)在市場(chǎng)上主流型號(hào)的熒光分辨率小于2.0%,有的甚至在1%之內(nèi)。
熒光靈敏度反映了儀器探測(cè)最小熒光光強(qiáng)的能力,一般用熒光微球上可測(cè)出的熒光(FITC)的最小分子數(shù)來(lái)表示。目前細(xì)胞分析儀可以達(dá)到100以內(nèi)。一般分析速度為500-10000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度控制在1000個(gè)細(xì)胞/s以下,分選純度>98%,有的細(xì)胞分析儀分析速度可達(dá)100000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度可達(dá)70000個(gè)細(xì)胞/s,分選純度>98%。
應(yīng)用方向不同,分析參數(shù)的多少差異較大,少的可以分析3個(gè)熒光參數(shù)和1個(gè)散射信號(hào),多的可以分析13個(gè)熒光參數(shù)和3個(gè)散射信號(hào)。
細(xì)胞分析儀的用途1、在臨床上的用途
細(xì)胞癌變過(guò)程中伴隨細(xì)胞DNA含量的改變,DNA非整倍體細(xì)胞是惡性腫瘤的特異性標(biāo)志。
細(xì)胞分析儀的FSC能夠給出這些信息,在腫瘤的早期診斷和鑒別診斷中有著很重要的作用;早在80年代人們發(fā)現(xiàn)特定T細(xì)胞亞群可以反映AIDS患者的臨床狀態(tài),而細(xì)胞分析儀可以對(duì)這些T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè),為AIDS的診斷、治療提供有用信息。
細(xì)胞分析儀借助于各種熒光染料測(cè)定一個(gè)細(xì)胞的多種參數(shù)完成白血病及淋巴瘤的診斷,準(zhǔn)確率達(dá)90%左右,較傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)檢查準(zhǔn)確性提高10%~20%。細(xì)胞分析儀對(duì)淋巴細(xì)胞及其亞群數(shù)量的檢測(cè),可以探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后,指導(dǎo)臨床治療方案。
2、在生物學(xué)及微生物學(xué)上的用途
從早期到現(xiàn)在,在細(xì)胞及細(xì)胞器方面很多已被人們所接受的科技,都經(jīng)細(xì)胞分析儀研究過(guò)。在細(xì)胞功能的早期研究中,研究者僅能通過(guò)觀測(cè)微生物的吞噬來(lái)研究噬中性粒子,而細(xì)胞分析儀可以通過(guò)它們的大小、形狀、抗體及吞噬過(guò)程中微生物種類、數(shù)量的變化更深入的辨別、研究這些噬中性粒子;氧自由基的實(shí)時(shí)、單細(xì)胞繁殖評(píng)價(jià),DNA倍體分析,細(xì)胞循環(huán)中細(xì)胞增殖和凋亡分析等都會(huì)用到細(xì)胞分析儀;細(xì)胞分析儀對(duì)細(xì)胞周期可以輕松分析,促進(jìn)了以此為基礎(chǔ)的植物學(xué)的發(fā)展,輔以成像儀器,細(xì)胞分析儀可以對(duì)微生物的成長(zhǎng)、繁殖進(jìn)行3-D研究。
3、在生殖學(xué)及制藥學(xué)上的用途
利用對(duì)精子DNA進(jìn)行無(wú)害標(biāo)定的DNA染料或H-Y抗體都可以對(duì)精子進(jìn)行檢測(cè)和分類,完成生殖學(xué)上的要求;細(xì)胞分析儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,對(duì)檢測(cè)臨床腫瘤化療效果及藥物的選擇有一定的意義。
此外,細(xì)胞分析儀在細(xì)胞毒,可溶性蛋白質(zhì)分子,鈣離子濃度檢測(cè)等都有很廣泛的用途。
2018-10-15 16:24:12 1711次 http://www.yiqi.com/daogou/detail_1089.html 熱門標(biāo)簽: 流式細(xì)胞儀的原理流式細(xì)胞儀的操作規(guī)程流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展流式細(xì)胞儀的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的選購(gòu)指南