反相高效液相色譜儀是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相反。

反相高效液相色譜儀是什么

反相高效液相色譜儀典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠，典型的流動相是甲醇和乙腈。反相高效液相色譜是當(dāng)今液相色譜的最主要的分離模式，幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機(jī)物的分離。反相色譜法適于分離非極性、極性或離子型化合物，大部分的分析任務(wù)皆由反相色譜法完成。

反相高效液相色譜是化學(xué)鍵合相色譜法的一種。化學(xué)鍵合相色譜法是由液液色譜法發(fā)展起來的，是為了解決在分離過程中，機(jī)械吸附在載體上的固體液的流失問題而發(fā)展出來的一種新方法。鍵合相色譜法通過將不同的有機(jī)官能團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)共價(jià)鍵合到硅膠載體表面的游離經(jīng)基上，而生成化學(xué)鍵合固定相，化學(xué)鍵合固定相對各種極性溶劑都有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。由它制備的色譜主柱效高、使用壽命長、重現(xiàn)性好，幾乎對各種類型的有機(jī)化合物都呈現(xiàn)良好的選擇性，并可用于梯度洗脫操作，消除了分配色譜法的缺點(diǎn)。

根據(jù)鍵合固定相和流動相相對極性的強(qiáng)弱，可將鍵合色譜法分為正相鍵合色譜法和反相鍵合色譜法。反相鍵合色譜法即反相高效液相色譜。在正相鍵合色譜法中，鍵合固定相的極性大于流動相的極性，適用于分離油溶性或水溶性的極性和強(qiáng)極性化合物。在反相鍵合相色譜法中，鍵合固定相的極性小于流動相的極性適用于分離非極性、極性或離子型化合物，其應(yīng)用范圍也比正相鍵合相色譜法更廣泛。

反相高效液相色譜儀的原理

在反相鍵合相色譜法中使用的是非極性鍵合固定相。它是將全多孔(或薄殼)微粒硅膠載體，經(jīng)酸活化處理后與含輕基鏈(C4、C8、C18)或苯基的硅烷化試劑反應(yīng)，生成表面具有烷基或苯基的非極性固定相。如共價(jià)結(jié)合到載體上的直鏈碳?xì)浠衔镎粱取?/p>

反相高效液相色譜儀分離機(jī)理：

吸附色譜的作用機(jī)制認(rèn)為溶質(zhì)在固定相上的保留主要是疏水作用，在高效液相色譜儀中又被稱為疏溶劑作用。根據(jù)疏溶劑理論，當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入極性流動相后，即占據(jù)流動相中相應(yīng)的空間，而排擠一部分溶劑分子。

當(dāng)溶質(zhì)分子被流動相推動與固定相接觸時(shí)，溶質(zhì)分子的非極性部分或非極性因子會將非極性固定相上附著的溶劑膜排擠開，而直接與非極性固定相上的烷基官能團(tuán)相結(jié)合(吸附)形成締合絡(luò)合物，構(gòu)成單分子吸附層。這種疏溶劑的吸附作用是可逆的，當(dāng)流動相極性減少時(shí)，這種疏溶劑斥力下降，會發(fā)生解締，并將溶質(zhì)分子解放而被洗脫下來。

反相高效液相色譜儀的優(yōu)點(diǎn)

1、幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機(jī)物的分離。反相色譜法適于分離非極性，極性或離子型化合物，大部分的分析任務(wù)皆由反相色譜法完成;

2、具有柱效高，使用壽命長，重現(xiàn)性好，幾乎對各種類型的有機(jī)化合物都具有良好的選擇性，用可用于梯度洗脫操作;

3、反相液相色譜儀應(yīng)用廣泛，技術(shù)方面也比較成熟，可以與大多數(shù)檢測器相匹配。

反相高效液相色譜和正相高效液相色譜的區(qū)別

高效液相色譜法包括正相高效液相色譜法和反相高效液相色譜法。

正相高效液相色譜法：采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相);流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環(huán)已烷)，常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯 甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等)。

反相高效液相色譜法：一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)高效液相色譜儀應(yīng)用的80%左右。

2019-03-05 11:17:21 925次 http://www.yiqi.com/daogou/detail_2523.html 熱門標(biāo)簽：
液相色譜儀由流動相儲液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。

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液相色譜儀是一種新型綜合分離分析儀器，在液相色譜儀的分離技術(shù)基礎(chǔ)上加入了液相色譜技術(shù)，對分離完成的被測食品基本成分進(jìn)行液相色譜分析，并以高壓輸出的方式實(shí)現(xiàn)對檢測結(jié)果的輸出，最終形成對被測食品質(zhì)量的綜合檢測結(jié)果。

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液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜及液-固色譜。由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。

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液相色譜儀在很多領(lǐng)域都有了非常好的應(yīng)用，它的運(yùn)行效率非常高，同時(shí)準(zhǔn)確性也非常的強(qiáng)，同時(shí)隨著時(shí)代的發(fā)展，液相色譜儀也在不斷的改進(jìn)，而在這一過程中其應(yīng)用的范圍也在不斷的拓展。

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