2020年12月，歐盟發(fā)布COMMISSION REGULATION (EU) 2020/2040，修訂條例 (EC) No. 1881/2006 關(guān)于某些食品中吡咯里西啶類生物堿（Pyrrolizidine Alkaloids，以下簡(jiǎn)稱PAs）的最高含量，正式設(shè)定PAs在食品中的限量要求。其中對(duì)于茶葉和調(diào)味茶中的限量為150μg/kg，該限量要求計(jì)算21種吡咯里西啶類生物堿的總和。該法規(guī)將于2022年7月1日正式執(zhí)行。

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PAs是植物產(chǎn)生的用于抵御食草動(dòng)物的一類毒素，分布廣泛。大多具有肝毒性和潛在致癌性，可以在蜂蜜、茶和草藥中找到。每種PA的毒性各不相同，對(duì)于食品制造商和食品藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)而言，準(zhǔn)確識(shí)別和量化食品中的PAs至關(guān)重要。

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迄今為止，已知的PA超過(guò)660種，其中許多是異構(gòu)體。對(duì)于異構(gòu)體PA的鑒定，與LC-MS/MS相比，SFC-MS/MS提供了更加優(yōu)異的色譜選擇性。本文介紹利用SFC-MS/MS分析34種吡咯里西啶類生物堿（包括5種石松胺和2種千里光寧堿異構(gòu)體）的應(yīng)用案例，輕松應(yīng)對(duì)歐盟茶葉檢測(cè)新規(guī)。

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樣品前處理：茶樣品用 0.05 M 硫酸超聲提取兩次，合并提取物并用氫氧化銨調(diào)節(jié)pH值，然后進(jìn)行固相萃取（具體步驟參見原文），洗脫物氮吹干燥后用1mL甲醇復(fù)溶，離心10min后取上清液待測(cè)。

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色譜及質(zhì)譜條件：參見原文。

SFC-MS/MS分析34種吡咯里西啶類生物堿的典型色譜圖

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5種石松胺和2種千里光寧堿異構(gòu)體基線分離色譜圖

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利用島津SFC方法開發(fā)系統(tǒng)，分別考察了4種不同的手性色譜柱和8種不同的改性劑組成的色譜條件。得到的最終分析條件，可以對(duì)18種PA和16種相關(guān)N-氧化物進(jìn)行定量分析。對(duì)紅茶基質(zhì)樣品的分析結(jié)果表明從2到200μg/kg 范圍內(nèi)線性良好，部分PA定量下限可達(dá)到0.1μg/kg。具體數(shù)據(jù)參見下表。

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紅茶基質(zhì)中34種吡咯里西啶類生物堿的 LLOQ

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基于本方法分析了10種市售茶葉樣品，其中4種可以檢出1種或多種吡咯里西啶生物堿。1個(gè)茶葉樣品中檢出了歐天芥菜堿、天芥菜堿、毛果天芥菜堿及其相關(guān)N-氧化物，3個(gè)茶葉樣品中檢出了石松胺、刺凌德草堿及其相關(guān)N-氧化物。

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本應(yīng)用中使用的儀器（Nexera SFC+LCMS-8060）

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參考文獻(xiàn)：

1，Determination of pyrrolizidine alkaloids in plant material using SFC-MS/MS, ASMS 2019, TP-221

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