細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定，這些問(wèn)題你遇到過(guò)么？

下圖是一個(gè)典型的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖

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細(xì)胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8，MTT等方法。其中測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是檢測(cè)細(xì)胞絕對(duì)生長(zhǎng)數(shù)的常用方法，也是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)，是細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)之一。因?yàn)榧?xì)胞太小，無(wú)法測(cè)單個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，所以測(cè)細(xì)胞群體的生長(zhǎng)曲線。

在做細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定過(guò)程中，我們經(jīng)常遇到以下幾個(gè)問(wèn)題：

1、如何選擇細(xì)胞接種數(shù)？

答：可根據(jù)細(xì)胞傳代培養(yǎng)過(guò)程中接種數(shù)及細(xì)胞生長(zhǎng)周期進(jìn)行計(jì)算，細(xì)胞接種數(shù)因細(xì)胞的不同而不同。

2、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定時(shí)為什么要做重復(fù)孔？

答：測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)選擇 3 個(gè)復(fù)孔，每孔分別計(jì)三次，取其平均值，目的是減小操作誤差。

3、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定周期是幾天？

答：一般是一個(gè)星期。

4、為什么繪制的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線沒(méi)有達(dá)到平臺(tái)期？

答：可能有以下原因：一是細(xì)胞接種密度過(guò)低；二是細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間過(guò)短；三是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，使其不能正常增殖。

5、為什么細(xì)胞計(jì)數(shù)第一天，細(xì)胞數(shù)沒(méi)有增加反而減少？

答：一般細(xì)胞傳代后，會(huì)有一個(gè)生長(zhǎng)緩慢的潛伏期，細(xì)胞不增殖，而細(xì)胞會(huì)有正常的死亡，故細(xì)胞數(shù)不增加反而減少。

6、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線還有其他方法繪制嗎？

答：當(dāng)然有。我們提到最多的是直接計(jì)數(shù)的方法，除此以外還有相對(duì)計(jì)數(shù)的方法，該類方法首先要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)定細(xì)胞數(shù)和某個(gè)變量的函數(shù)關(guān)系，然后我們只需要測(cè)定每天這個(gè)變量的值便可以計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。常用的是 MTT、CCK8 等比色的方法

實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)

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WIGGENS全尺寸CO2培養(yǎng)箱。培養(yǎng)箱內(nèi)設(shè)置多層活動(dòng)托板，可用于T瓶，培養(yǎng)皿，微孔板等靜態(tài)培養(yǎng)；培養(yǎng)箱內(nèi)有電源插口，可以放置搖床，磁力攪拌器等用于細(xì)胞的動(dòng)態(tài)培養(yǎng)。底部有專用的滾瓶機(jī)滾輪槽，方便使用滾瓶機(jī)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

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1、 WIGGENS二氧化碳培養(yǎng)箱專用振蕩器，解決了二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的振蕩問(wèn)題。獨(dú)創(chuàng)的防腐蝕，分體式設(shè)計(jì)等，滿足二氧化碳培養(yǎng)箱動(dòng)態(tài)培養(yǎng)解決方案。

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振蕩器在培養(yǎng)箱中的擺放位置

2、CELLine微型細(xì)胞工廠專用于連續(xù)，超高密度培養(yǎng)。既可以用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)或貼壁細(xì)胞培養(yǎng)。

CELLine二室技術(shù)示意圖

3、滾瓶機(jī)用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)

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4、飛旋瓶用于懸浮細(xì)胞和貼壁微載體細(xì)胞培養(yǎng)，專用磁力攪拌器提供飛旋瓶攪拌動(dòng)力。