隨著諾華CART細(xì)胞治療商品Kymriah??靜脈輸注懸浮液獲FDA批準(zhǔn)上市，作為一種新型的生物療法，利用患者自身免疫細(xì)胞對抗癌癥，已為我們開啟了一個全新抗癌新篇章。利用細(xì)胞治療方法，對抗更多種類的腫瘤，包括實(shí)體瘤，如神經(jīng)膠質(zhì)瘤，是當(dāng)前腫瘤免疫治療的熱點(diǎn)。目前CART細(xì)胞治療，也存在不少瓶頸難題，如缺少腫瘤特異性靶點(diǎn)、on-target/off-tumor副作用、通用差和生產(chǎn)制備成本高等問題，而納米載體可通過“特洛伊木馬”效應(yīng)，聯(lián)合其他治療手段，改善細(xì)胞治療中遇到的瓶頸難題。

腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性侵襲性生長腫瘤，臨床治療常采用手術(shù)結(jié)合放/化療的方法。一線腦膠質(zhì)瘤化療藥物替莫唑胺（Temozolomide, TMZ）可透過血腦屏障，但術(shù)后治療效果并不盡人意。而其他抗腫瘤藥物，如紫杉醇等，則因難以透過血腦屏障而不能應(yīng)用于腦膠質(zhì)瘤臨床治療。

2017年中國藥科大學(xué)張燦教授課題組在Nature Nanotechnology雜志（影響因子38.986）上發(fā)表論文，借助脂質(zhì)體納米載體，使用中性粒細(xì)胞治療與化療藥物紫杉醇（Paclitaxel, PTX）聯(lián)合治療腦膠質(zhì)瘤，實(shí)現(xiàn)了高效自主引導(dǎo)的藥物靶向遞送，對原位腦膠質(zhì)瘤小鼠模型術(shù)后的復(fù)發(fā)起到顯著抑制效果。

如上流程圖所示，，將紫杉醇PTX在體外包裹形成PTX-CL陽離子脂質(zhì)體，與從小鼠體內(nèi)分離的中性粒細(xì)胞（Netrophils, NEs）孵育，中性粒細(xì)胞將PTX-CL吞噬胞內(nèi)形成細(xì)胞制劑（PTX-CL/NEs）。通過尾經(jīng)脈注射將細(xì)胞制劑注入原位腦膠質(zhì)瘤術(shù)后小鼠模型體內(nèi)，細(xì)胞制劑透過血腦屏障（Blood-Brain Barrier, BBB）到達(dá)腦膠質(zhì)瘤區(qū)域。隨后被腫瘤區(qū)內(nèi)高濃度炎癥因子激活，形成胞外誘捕網(wǎng)（Neutrophil Extracellular Traps, NETs），將細(xì)胞制劑內(nèi)的紫杉醇脂質(zhì)體從細(xì)胞內(nèi)釋放出來，被腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞攝取，從而發(fā)揮抗腦膠質(zhì)瘤作用。

在3D膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型上，使用Cou6探針（綠色）標(biāo)記脂質(zhì)體納米顆粒，通過共聚焦光學(xué)切片觀察不同處理條件下的脂質(zhì)體對3D細(xì)胞的浸潤情況， Cou6-CL/NEs復(fù)合體組能更好的侵入3D腫瘤細(xì)胞微球內(nèi)部（上圖d）。在單層G422神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型上，通過Cou6探針（綠色）標(biāo)記脂質(zhì)體／DiR（紫色）標(biāo)記中性粒細(xì)胞／Hoechst（藍(lán)色）標(biāo)記所有細(xì)胞核／PI（紅色）標(biāo)記死細(xì)胞，通過顯微成像觀察不同處理時間點(diǎn)，中性粒細(xì)胞釋放NETs及對G422膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷情況，隨著時間的推移，8小時后中性粒細(xì)胞釋放Cou6，且被G422細(xì)胞內(nèi)吞后造成細(xì)胞死亡（上圖e）。通過G422細(xì)胞存活實(shí)驗進(jìn)一步驗證，PMA處理的細(xì)胞制劑（PTX-CL/NEs）與PTX-CL具有相當(dāng)?shù)哪[瘤殺傷效果（上圖f）。

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在G422細(xì)胞原位接種腦膠質(zhì)瘤小鼠術(shù)后模型上，使用DiR染料標(biāo)記PTX-CL/NEs，通過小動物活體成像，監(jiān)測PTX-CL/NEs在不同組織內(nèi)的實(shí)時分布情況，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)PTX-CL/NEs能有效透過血腦屏障到達(dá)腦部神經(jīng)膠質(zhì)瘤病灶區(qū)（上圖b/e）。從小鼠生存曲線來看，PTX-CL/NEs處理組與其他對照組相比能顯著提高治療效果（上圖f），且與病理切片免疫組化結(jié)果完全一致（上圖g）。

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衛(wèi)星會：PerkinElmer生物制藥研發(fā)創(chuàng)新論壇用戶交流會

時間：4月19日 16:30-18:00

地點(diǎn)：第五屆生物藥物創(chuàng)新及研發(fā)國際研討會 分會場

PerkinElmer展臺號：A7

16:30-16:50

生物制藥研發(fā)及創(chuàng)新征程中，PerkinElmer與您同行！?

講者：張薇，PerkinElmer市場開發(fā)部經(jīng)理