蔗糖轉(zhuǎn)化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)*適 pH,將高等植物Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)和中性轉(zhuǎn)化酶(NI)兩種類(lèi)型。AI主要存在于細(xì)胞液泡或自由空間中,*適 pH 為4.5~5.0(酸性),通過(guò)降解液泡中蔗糖,調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實(shí)內(nèi)糖類(lèi)的積累。AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。
酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)的活性計(jì)算如下:
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=0.0016x-0.001;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度( g/mL),y為吸光值。
(1)按蛋白濃度計(jì)算
單位定義:37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1 g還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
NI活性(U/mg prot)=[( A+0.001) 0.0016 V1] (V1 Cpr) T=20.8 ( A+0.001) Cpr
(2)按鮮重計(jì)算
單位定義:37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1 g還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
NI活性(U/g)=[( A+0.001) 0.0016 V1] (W V1 V2) T=20.8 ( A+0.001) W
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;T:反應(yīng)時(shí)間:30min。