去年11月，Illumina領(lǐng)投知名數(shù)字PCR廠商Stilla Technologies 1600萬歐元的A輪融資。同在11月，在美國召開的分子病理學(xué)協(xié)會年會上，羅氏報告了自家數(shù)字PCR儀的研發(fā)進展。今年年初，第37屆摩根大通醫(yī)療保健大會上，凱杰宣布已經(jīng)從波士頓公司Formulatrix手中收購了數(shù)字PCR技術(shù)。2月中旬，伯樂數(shù)字PCR系統(tǒng)獲批FDA。

外企動作頻出，國產(chǎn)廠商也相繼發(fā)力。新羿生物、銳訊生物、臻準生物等多家國內(nèi)廠商相繼推出數(shù)字PCR系統(tǒng)。

近兩年來，國內(nèi)數(shù)字PCR廠商已涌現(xiàn)10余家，數(shù)字PCR市場開始迸發(fā)活力!數(shù)字PCR為何如此多嬌，引各路廠商競折腰?91儀器信息網(wǎng)特別策劃了數(shù)字PCR專題。本期，我們邀請國產(chǎn)數(shù)字PCR知名廠商新羿生物副總裁楊文軍，談?wù)勊龑?shù)字PCR的觀點和看法。

新羿生物副總裁 楊文軍

91儀器信息網(wǎng)：請您談一下您對數(shù)字PCR技術(shù)的看法。

楊文軍：從1999年第一篇提出digital PCR(數(shù)字PCR)概念的文章發(fā)表，至今正好20年。20年來，此項技術(shù)從概念轉(zhuǎn)化為產(chǎn)品有多種實現(xiàn)途徑，但原理基本一致，即通過各種手段將靶標分子稀釋并平均分配到幾萬個反應(yīng)腔室中，通過單個模板分子的PCR擴增，可實現(xiàn)不依賴于標準曲線和參照樣本的準確、絕對定量。同時分散稀釋可以顯著地降低了PCR抑制劑的濃度，這使得數(shù)字PCR的反應(yīng)效率大大優(yōu)于熒光定量PCR(qPCR)。

微滴數(shù)字PCR原理

與其他傳統(tǒng)分子診斷技術(shù)相比，數(shù)字PCR技術(shù)吸引人之處主要有三點：一是高靈敏度，可實現(xiàn)單分子級檢測；二是絕對定量，不依賴標準品和參考曲線；三是高穩(wěn)定性和較高的抗干擾能力，耐受較高的PCR抑制劑，適用于多種復(fù)雜樣本。因此，數(shù)字PCR在臨床市場的應(yīng)用前景巨大，特別適用于低豐度核酸分子的檢測和定量。

數(shù)字PCR在臨床市場的應(yīng)用有獨特的優(yōu)勢，尤其針對具有明確靶向位點信息的基因檢測。與二代測序相比，操作簡單，不需要進行文庫構(gòu)建、生物信息學(xué)解讀復(fù)雜操作，醫(yī)院檢驗科可自己操作，報告時間短，當天可出結(jié)果，費用低；與qPCR相比，檢測靈敏度高，達到絕對定量，可以增加很多用傳統(tǒng)qPCR方法無法勝任的檢測項目。

91儀器信息網(wǎng)：目前，市售數(shù)字PCR儀主流產(chǎn)品為進口，國產(chǎn)數(shù)字PCR儀的機會在哪里?

楊文軍：雖然數(shù)字PCR市場現(xiàn)在基本上還是被國際大品牌所占有，國產(chǎn)數(shù)字PCR儀將會有很多機會。首先，通過技術(shù)創(chuàng)新規(guī)避了現(xiàn)有成熟品牌目前所有的缺陷，在樣本制備、芯片設(shè)計、數(shù)據(jù)采集等各方面有較大的性能提高；其次，利用國內(nèi)的產(chǎn)業(yè)制造優(yōu)勢，儀器、芯片、耗材成本大大降低，使得數(shù)字PCR儀進入臨床應(yīng)用具備了經(jīng)濟可行性；另外，一些優(yōu)秀的國內(nèi)數(shù)字PCR廠商，比如新羿生物，在完全自主知識產(chǎn)權(quán)數(shù)字PCR系統(tǒng)基礎(chǔ)上，大力開發(fā)腫瘤液體活檢、無創(chuàng)產(chǎn)前篩查、感染性疾病早期診斷等領(lǐng)域的診斷試劑盒，這將迅速推動數(shù)字PCR的應(yīng)用和普及。國產(chǎn)儀器比國際品牌能更好的與國內(nèi)科研領(lǐng)袖開展學(xué)術(shù)合作，可以提供更好的服務(wù)，對客戶需求反應(yīng)更迅速，技術(shù)支持方面更能滿足國內(nèi)客戶的需要。

91儀器信息網(wǎng)：貴公司區(qū)別于其他數(shù)字PCR儀產(chǎn)品的核心技術(shù)是什么?

楊文軍：新羿TD-1數(shù)字PCR系統(tǒng)有過硬的核心技術(shù)，一個突出的體現(xiàn)是新羿生物能夠?qū)?shù)字PCR儀、芯片、試劑、耗材各方面都做到自主創(chuàng)新。目前新羿已申請50余項相關(guān)專利，并已經(jīng)開始布局PCT國際專利的申請。這些創(chuàng)新涵蓋了數(shù)字PCR的全流程和整個系統(tǒng)。通過系統(tǒng)性的創(chuàng)新，可以實現(xiàn)更好的自動化、避免臨床樣本間的污染、提高參數(shù)性能(比如微液滴數(shù)量、制備均一性、微液滴擴增后穩(wěn)定性)，這些創(chuàng)新的目的是更好的滿足臨床需求。

新羿TD-1數(shù)字PCR系統(tǒng)

91儀器信息網(wǎng)：您對數(shù)字PCR市場的前景有什么看法?看好的細分領(lǐng)域有哪些?

楊文軍：我們非?？春脭?shù)字PCR的市場前景，尤其是臨床市場，數(shù)字PCR在如下領(lǐng)域非常具有吸引力：一、腫瘤的液體活檢，通過檢測血漿中的腫瘤循環(huán)DNA(ctDNA)，為腫瘤的伴隨診斷、療效監(jiān)控和預(yù)后判斷提供可靠數(shù)據(jù)。二、無創(chuàng)的產(chǎn)前篩查，通過檢測孕婦外周血胎兒游離核酸，可以比二代測序更快更便宜的開展唐氏綜合征等染色體疾病檢測。三、感染性疾病的早期和快速診斷，為重癥和術(shù)后病人第一時間提供治療建議。這三個領(lǐng)域具有非常龐大的市場需求。

數(shù)字PCR應(yīng)用于無創(chuàng)產(chǎn)前檢測

91儀器信息網(wǎng)：您認為數(shù)字PCR儀真正走進應(yīng)用領(lǐng)域需要克服哪些困難?

楊文軍：數(shù)字PCR儀的技術(shù)先進性已經(jīng)有共識，是未來臨床分子診斷的關(guān)鍵平臺。要做的這一點，需要更好的滿足臨床需求，比如防污染、自動化、通量高、穩(wěn)定性好、成本低，這幾年可預(yù)期的另一數(shù)字PCR突破就是實現(xiàn)多指標檢測。好的產(chǎn)品都是在使用中成長起來的，優(yōu)秀的產(chǎn)品穩(wěn)定性帶來愉快的使用體驗，這需要時間的歷練。