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密閉油墨星象采用該如何加載

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-04-25  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):50
核心提示:真空轉(zhuǎn)印儀使用需要剪一塊尼龍膜,要求其大小比窗口密封墊的邊緣至少寬0.5cm。再剪一張與尼龍膜大小一致的濾紙。剪一塊窗口密封墊,要求密封墊的邊緣比膠的邊緣至少窄0.5cm。  真空轉(zhuǎn)印儀操作步驟:  1.把尼龍膜以45度
真空轉(zhuǎn)印儀使用需要剪一塊尼龍膜,要求其大小比窗口密封墊的邊緣至少寬0.5cm。再剪一張與尼龍膜大小一致的濾紙。剪一塊窗口密封墊,要求密封墊的邊緣比膠的邊緣至少窄0.5cm。
  真空轉(zhuǎn)印儀操作步驟:
  1.把尼龍膜以45度角方向浸入水中,潤濕膜,然后在在合適的轉(zhuǎn)印溶液中浸潤膜。
  2.把孔狀真空板置于平臺上。依次放置潤濕的濾紙,尼龍膜,用10ml的玻璃管趕走膜上的氣泡。
  3.用水潤濕密封O型環(huán)。
  4.把窗口密封墊置于膜上。確保密封墊覆蓋住整個O型環(huán)。同時確保密封墊覆蓋住濾紙/膜。請參照下圖進(jìn)行組裝。
  5.把膠輕柔的置于密封墊上,覆蓋住窗口。用玻璃管趕走氣泡,確保膠的邊緣超出密封墊至少5cm。
  6.把密封框置于頂部,鎖住密封框。
  7.旋松(逆時針)真空調(diào)節(jié)閥幾圈以防止強(qiáng)的內(nèi)部真空。
  8.慢慢的旋緊調(diào)節(jié)閥直到讀數(shù)為5inchesHg。如果使用Bio-Rad的真空泵,需要在轉(zhuǎn)印前預(yù)熱10分鐘。如果不預(yù)熱,真空泵升壓會比較慢,約在10分鐘后穩(wěn)定。
  9.沿著窗口的邊緣用手指輕輕的按住膠。此操作可幫助在膠和密封墊之間形成緊密的真空密封。
  10.輕輕的倒入1000至1500ml的轉(zhuǎn)印緩沖液。檢查膠是否移位。如果膠漂浮起來了,需要拆掉密封框,排干轉(zhuǎn)膜液,重新按5至10步驟進(jìn)行操作。
  11.把轉(zhuǎn)印儀的蓋子蓋好。檢查緩沖液的水平面,其高度應(yīng)該高于膠。檢查真空壓力,調(diào)節(jié)至5inchesHg。
  12.在設(shè)定壓力下轉(zhuǎn)膜90分鐘。
  轉(zhuǎn)印后這樣操作:
  1.90分鐘后,關(guān)掉真空裝置。
  2.打開密封框,把上層緩沖液排出。
  3.拿掉轉(zhuǎn)印膠,位于窗口中的膠應(yīng)該比位于窗口外的膠薄一半。檢查膠中剩余的DNA,可以用EB染色來觀察。
  4.拿掉窗口密封墊和尼龍膜。把膜浸泡在2 SSC中5分鐘,然后把膜夾在兩層濾紙中在真空干燥箱中80度干燥30分鐘。干燥后的膜即可進(jìn)行雜交。
  5.拿掉轉(zhuǎn)印儀上的濾紙并從底盤中倒掉緩沖液,按要求清洗轉(zhuǎn)印儀。
 

 
關(guān)鍵詞: nbsp 密封 真空 密封墊 轉(zhuǎn)印
 
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