慢病毒包裝:慢病毒載體(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng),它能高效的將目的基因(或RNAi)導(dǎo)入動物和人的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。慢病毒載體基因組是正鏈RNA,其基因組進(jìn)入細(xì)胞后,在細(xì)胞漿中被其自身攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)為DNA,形成DNA整合前復(fù)合體,進(jìn)入細(xì)胞核后,DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA,回到細(xì)胞漿中,表達(dá)目的蛋白;或產(chǎn)生RNAi干擾。慢病毒載體介導(dǎo)的基因表達(dá)或RNAi干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定,原因是目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組中,并隨細(xì)胞基因組的分裂而分裂。
另外,慢病毒載體能有效感染并整合到非分裂細(xì)胞中。以上特性使慢病毒載體與其它病毒載體相比,比如不整合的腺病毒載體、整合率低的腺相關(guān)病毒載體、只整合分裂細(xì)胞的傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,有鮮明的特色。大量文獻(xiàn)研究表明,慢病毒載體介導(dǎo)的目的基因長期表達(dá)的組織或細(xì)胞包括腦、肝臟、肌肉、視網(wǎng)膜、造血干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等。慢病毒載體不表達(dá)任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位無細(xì)胞免疫反應(yīng),體液免疫反應(yīng)也較低,不影響病毒載體的第2次注射。
慢病毒包裝的優(yōu)點:
1、能將外源基因有效整合入宿主染色體,外源基因表達(dá)水平較高、表達(dá)穩(wěn)定;
2、廣泛的宿主,可感染分裂和不分裂的細(xì)胞,幾乎可以感染所有類型的細(xì)胞,特別適合質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染效率低的細(xì)胞;
3、適用范圍廣,可用于體外細(xì)胞系和活體動物模型,研究基因和RNAi等;
4、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高,不需要轉(zhuǎn)染試劑,目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的概率大大增加。