合肥合生生物工程有限公司成立于2019年，注冊資金100萬元，公司辦公場所坐落合肥光谷生物城。合生生物致力于為行業(yè)內(nèi)的客戶提供技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓等服務(wù)，秉承著“我們用心 客戶省心”的服務(wù)理念打造出一支敢于創(chuàng)新、敢于挑戰(zhàn)的綜合服務(wù)團隊。

合生生物主營業(yè)務(wù)：大鼠纖維環(huán)細胞、細胞庫、試劑、/抗原、、多肽、耗材/消耗品、實驗儀器/設(shè)備、器械等。

合生生物以技術(shù)為主導(dǎo)，產(chǎn)品的質(zhì)量為核心，服務(wù)體系為保障，發(fā)揮人才優(yōu)勢，長期致力于打造成國內(nèi)先進的科研企業(yè)與機構(gòu)。

合生生物持續(xù)通過開放的合作態(tài)度、專業(yè)的服務(wù)機制、持續(xù)的**理念全力打造企業(yè)的核心競爭力為成為上等的行業(yè)服務(wù)供應(yīng)商銳意進取。大鼠纖維環(huán)細胞。復(fù)蘇操作流程

 

1. 準備工作，開水浴鍋，預(yù)熱試劑，超凈工作臺紫外照射 30min,找到對應(yīng)細胞在液氮罐中的位置

2. 紫外照射后風(fēng)機吹 10min 后，酒精擦拭臺面，放入試劑和離心管，取 15ml 離心管，加入 9ml 培養(yǎng)液

3. 在液氮罐中取出細胞，先擰松放液氮，再擰緊，將凍存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min

4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺內(nèi)，擦干管壁，用 1ml 頭將細胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中

5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平

6. 將離心好的細胞棄上清，加入 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，用移液管吹打 8-10 次， 避免產(chǎn)生氣泡，將細胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中，補加 5ml 培養(yǎng)液

7. 混勻，十字法或者 8 字法

8. 將混好的細胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

 大鼠纖維環(huán)細胞。注意事項

 

1. 上述操作方案的數(shù)據(jù)可作為參考，實際操作已實驗室配備的耗材為準，

2. 凍存時含 10%DMSO,事先加 9ml 培養(yǎng)液是為了稀釋 DMSO，理論上 1%DMSO

對細胞性

3. 隔著 PE 手套能有效防止水浴過程中導(dǎo)致污染

4. 重懸的體積只是作為參考，具體的根據(jù)需要可進行調(diào)整

5. 由于復(fù)蘇過程中已經(jīng)離心，第二天可根據(jù)實際情況選擇換液或者不換液（主要針對貼壁細胞）大鼠纖維環(huán)細胞。培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL大鼠纖維環(huán)細胞。懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。大鼠纖維環(huán)細胞。培養(yǎng)注意事項

1. 收到大鼠纖維環(huán)細胞。后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀大鼠纖維環(huán)細胞。說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細 胞匯 合度80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6.建議客戶收到大鼠纖維環(huán)細胞。后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 志偉技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

大鼠淋巴成纖維細胞：待審核