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MMP9酶;顆粒金屬和酵素9(MMP9)改組酶

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-27  來源:儀器網  作者:Mr liao  瀏覽次數:44
核心提示:MMP9蛋白;基質金屬蛋白酶9(MMP9)重組蛋白英文名稱:Recombinant Matrix Metalloproteinase 9 (MMP9)GELB; Gelatinase B; CLG4B; CLG4-B; 92 KDa Gel

MMP9蛋白;基質金屬蛋白酶9(MMP9)重組蛋白

英文名稱:Recombinant Matrix Metalloproteinase 9 (MMP9)

GELB; Gelatinase B; CLG4B; CLG4-B; 92 KDa Gelatinase; 92kDa Type IV Collagenase

來源:原核表達

宿主:E.coli

規(guī)格:10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書

片段與標簽:N-terminal His Tag

物種來源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種)相同的名稱,不同的物種。

MMP9蛋白;基質金屬蛋白酶9(MMP9)重組蛋白性狀:凍干粉

表達系統:  大腸桿菌

產品純度: 95%-98%(SDS-PAGE RP-HPLC)

保存條件:如果樣品在2-4周內使用,可以在4°C低溫儲存。 

長期儲存,建議添加載體蛋白(0.1%HSA或BSA),并儲存在-20~ -80°C。避免多次凍融。

MMP9蛋白;基質金屬蛋白酶9(MMP9)重組蛋白

蛋白重組表達策略組合

重組蛋白的表達往往不像理論那樣一帆風順,在實際的表達過程中有可能產生各種各樣的問題。在選擇一個的蛋白表達策略非常困難的情況下,那么采用看似笨拙的方法,有可能會成為一種意想不到的“成功捷徑”,比如項目要求構建表達兩種重組蛋白時,構建6種不同的表達質粒,意味著有36種不同的表達條件組合,通過高通量微量蛋白表達實驗一次性就可獲得蛋白表達條件組合,后續(xù)中式飛行試驗和成本控制會變得相對容易。

蛋白原核重組表達服務具體流程

MMP9蛋白;基質金屬蛋白酶9(MMP9)重組蛋白融合標簽選擇:

親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據具體案例來分析。

不同的系統步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達系統的重組蛋白表達步驟:

a.  選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)

b.  表達載體的構建

c.  無內毒素的質粒抽提

d.  細胞瞬時轉染

e.  表達小試,條件優(yōu)化

f.  表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)

g.  大量表達

h.  親和純化

i.  檢測和鑒定

原核表達系統的重組蛋白表達步驟:

a.  選擇表達載體

b.  密碼子優(yōu)化

c.  基因合成/亞克隆

d.  轉化表達菌株

e.  蛋白表達小試分析

f.  如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.  如果蛋白不可溶,則需要變復性來制備可溶蛋白。

h.  鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定

MMP9蛋白;基質金屬蛋白酶9(MMP9)重組蛋白表達蛋白的分析、純化、檢測

誘導表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

雖然,在大腸桿菌中表達的蛋白由于缺少高級修飾和糖基化、磷酸化等翻譯后加工,常形成包涵體而影響表達蛋白的生物學活性及構象等缺點,但原核表達具有的操作簡單、快捷,需時較短,表達產量高,適合工業(yè)化等優(yōu)點,仍是我們合成外源蛋白的選擇。原核表達的全過程有許多不確定因素,所以每完成一步都得檢驗結果是否正確,當實驗遇到困難時如何進行分析,找到問題的癥結是我們實驗的關鍵。

 


 
關鍵詞: 蛋白 表達 nbsp .& 重組
 
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