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G422血清大腦膠質(zhì)瘤蛋白

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-27  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):45
核心提示:G422小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞作為中國的經(jīng)濟、科技、工業(yè)中心,上海是生物試劑行業(yè)的必爭之地,便利的交通貫穿江浙滬等經(jīng)濟發(fā)達地區(qū),輻射向全國,加之上海企業(yè)繁多,對試劑的需求量非常大,所以,上海是當之無愧的促進試劑企業(yè)發(fā)展的黃金地。而我司位于上海有

G422小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞作為中國的經(jīng)濟、科技、工業(yè)中心,上海是生物試劑行業(yè)的必爭之地,便利的交通貫穿江浙滬等經(jīng)濟發(fā)達地區(qū),輻射向全國,加之上海企業(yè)繁多,對試劑的需求量非常大,所以,上海是當之無愧的促進試劑企業(yè)發(fā)展的黃金地。而我司位于上海有完善的設(shè)備及產(chǎn)品服務于廣大客戶!


細胞名稱:    G422小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

種屬來源:   小鼠

組織來源:   神經(jīng)

疾病特征:   神經(jīng)膠質(zhì)瘤

細胞形態(tài):   上皮細胞樣

生長特性:   貼壁生長

培 養(yǎng) 基:   DMEM培養(yǎng)基,90%;FBS,10%。

生長條件:   氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37 ℃, 

傳代方法:   1:2至1:6,每周2次。

凍存條件:   90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲存

支原體檢測: 陰性


特點和簡介

1964年建株;甲基膽蒽植入Km小鼠腦內(nèi)誘發(fā)星形細胞瘤,傳至第120代后轉(zhuǎn)為膠質(zhì)細胞瘤;瘤細胞懸液同系小鼠皮下、肌肉、腦內(nèi)移植,成功率皆。肌肉及腦內(nèi)移植可形成較規(guī)律的移植性瘤株,存活時間腦內(nèi)型15.9±4.8天;肌肉型20.3±6.6天。


培養(yǎng)操作

1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。


2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。


1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。


2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。


3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。


4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。


3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;


1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。


2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍存管做好標識。


3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。


培養(yǎng)注意事項

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。


2.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題,責任由客戶自行承擔。


3.用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細胞無活力,請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。


4.靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細 胞匯合度  80%左右時正常傳代。


5.請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞 傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。


6.建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù) 部溝通交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián) 系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。


7.該細胞僅供科研使用。


接受后處理

1)  收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。


2)  請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。


3)  棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,G422小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。


4)  如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。


5)  接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。


 
 
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