G422小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞作為中國的經(jīng)濟、科技、工業(yè)中心，上海是生物試劑行業(yè)的必爭之地，便利的交通貫穿江浙滬等經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)，輻射向全國，加之上海企業(yè)繁多，對試劑的需求量非常大，所以，上海是當之無愧的促進試劑企業(yè)發(fā)展的黃金地。而我司位于上海有完善的設(shè)備及產(chǎn)品服務于廣大客戶！

細胞名稱:    G422小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

種屬來源:   小鼠

組織來源:   神經(jīng)

疾病特征:   神經(jīng)膠質(zhì)瘤

細胞形態(tài):   上皮細胞樣

生長特性:   貼壁生長

培 養(yǎng) 基:   DMEM培養(yǎng)基，90%；FBS，10%。

生長條件:   氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃, 

傳代方法:   1：2至1：6，每周2次。

凍存條件:   90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存

支原體檢測: 陰性

特點和簡介

1964年建株；甲基膽蒽植入Km小鼠腦內(nèi)誘發(fā)星形細胞瘤，傳至第120代后轉(zhuǎn)為膠質(zhì)細胞瘤；瘤細胞懸液同系小鼠皮下、肌肉、腦內(nèi)移植，成功率皆。肌肉及腦內(nèi)移植可形成較規(guī)律的移植性瘤株，存活時間腦內(nèi)型15.9±4.8天；肌肉型20.3±6.6天。

培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶自行承擔。

3.用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細 胞匯合度  80%左右時正常傳代。

5.請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

6.建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù) 部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7.該細胞僅供科研使用。

接受后處理

1)  收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2)  請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3)  棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，G422小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

4)  如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

5)  接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。