Waters液質聯用方法檢測飼料中喹乙醇及其代謝物

參考國標：農業(yè)部2086號公告-5-2014 飼料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的測定 液相色譜-串聯質譜法

前處理方法：Oasis HLB 200mg/6mL  (P/N:WAT106202)

1、 樣品提取 — 參考國標

準確稱取飼料2g（預混合飼料1g）于50mL離心管中。加入0.1%甲酸-乙腈溶液10mL，渦旋1min，40度超聲10min，9000rpm離心15min，收集上清液。殘渣用0.1%甲酸-乙腈溶液10mL重復提取一次并合并提取液。精確量取5mL上述提取液在60度下氮吹至2mL，然后用4mL 0.1moL/L磷酸二氫鉀充分溶解殘余物，待凈化。

2、 樣品凈化 HLB （200mL/6CC）

活化、平衡：3mL甲醇、3mL水

上樣：將上述備用液過柱

淋洗：3mL 0.02mol/L 鹽酸、3mL 5%甲醇

洗脫：5mL 甲醇

收集洗脫液后氮氣吹干，用1mL 20%乙腈溶解后果0.22um 濾膜待上機

色譜質譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm,2.1 mm，1.7μm)  (P/N:186002353)

柱溫：30℃；

進樣量：10 μL

流動相及參考梯度洗脫程序見下表。

時間(min)

流速(mL/min)

0.1％甲酸溶液(％)

乙腈(％)

0

0.3

95

5

1.0

0.3

95

5

2.0

0.3

60

40

3.0

0.3

60

40

3.1

0.3

95

90

質譜采用ESI+檢測方式，多反應監(jiān)測（MRM）。毛細管電壓為3.4 Kv； 源溫度為150℃；脫溶劑氣溫度為550℃；脫溶劑氣流速為800L/hr；錐孔氣流速為20 L/hr。脫溶劑氣、錐孔氣、均為高純氮氣。碰撞氣為氬氣。

定性離子對、定量離子對及對應的錐孔電壓和碰撞能量見下表。 

被測物名稱

定性離子對（m/z）

定量離子對（m/z）

錐孔電壓（V）

碰撞能量（eV）

喹乙醇

264.2 212.3

264.2 212.2

16

15

264.2 177.1

20

飼料空白樣品與喹乙醇標準品對比譜圖 

液相方法分析喹乙醇代謝物喹噁啉-2-羧酸(QCA)、3-甲基喹噁啉-2-羧酸（MQCA）

參考國標：農業(yè)部781號公告-3-2006 動物源食品中3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸殘留量的測定 高效液相色譜法

前處理方法：使用Waters Oasis MAX 60mg/3mL (P/N:186001884)參考國標步驟

1、 樣品提取 — 參考國標

稱取肌肉樣品5g于離心管中，加入8mL偏磷酸甲醇溶液，渦旋2min，在25度下6000rpm離心15min，取出上清液。然后重復提取一遍后合并兩次上清液。向上清液中加入8mL乙酸乙酯，渦旋1min，4000rpm離心10min，取上層。再重復提取一遍后合并兩次上清液。有機相中，加磷酸鹽緩沖液6mL，渦旋1min，放置10min，使下層清晰，收集水相。然后再重復提取后合并，待凈化。

2、樣品凈化 (MAX 60mg/3CC)

活化、平衡：3mL甲醇、3mL水

上樣：備用液過柱

淋洗：3mL 0.05mol/L 氫氧化鈉、3mL甲醇

洗脫：3mL 2%甲酸甲醇

收集洗脫液后氮氣吹干，用500uL甲醇溶解后過0.45μm 濾膜待上機

儀器: Waters Alliance e2695

儀器方法：

流動相：1%甲酸水溶液+甲醇=60：40

色譜柱：XBrige C18 250mm×4.6mm，粒徑5μm (P/N:186003117)

流速：1 mL

檢測器：2998

紫外波長：320nm

進樣量：20μL

柱溫：30℃

3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸分離圖譜