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捍衛(wèi)蛋白熊貓執(zhí)著小鼠的五大徐樹(shù)錚

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-27  來(lái)源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):38
核心提示:隔壁的直男師兄今年喜得千金,最近總在實(shí)驗(yàn)室詭異地傻笑,問(wèn)他為何,說(shuō)是時(shí)常想起女兒的可愛(ài)模樣。?這種感情,沒(méi)養(yǎng)育過(guò)孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)育細(xì)胞,也一樣寄托感情,生怕細(xì)胞被養(yǎng)壞了。一個(gè)閃失,就前功盡棄。實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可靠,沒(méi)有一

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隔壁的直男師兄今年喜得千金,最近總在實(shí)驗(yàn)室詭異地傻笑,問(wèn)他為何,說(shuō)是時(shí)常想起女兒的可愛(ài)模樣。

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這種感情,沒(méi)養(yǎng)育過(guò)孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)育細(xì)胞,也一樣寄托感情,生怕細(xì)胞被養(yǎng)壞了。一個(gè)閃失,就前功盡棄。實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可靠,沒(méi)有一致性和穩(wěn)定性,還重復(fù)不出來(lái),再濃密的頭發(fā)也經(jīng)不住這樣的考驗(yàn)。所以,有一個(gè)穩(wěn)定、一致的培養(yǎng)環(huán)境,那就很重要了。

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培養(yǎng)細(xì)胞不可能24小時(shí)值守,快快請(qǐng)出四大護(hù)法相助!

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1.???? 大護(hù)法:二甲基亞砜(DMSO)

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成功凍存和復(fù)蘇細(xì)胞是細(xì)胞培養(yǎng)研究的常規(guī)操作。細(xì)胞低溫儲(chǔ)藏時(shí),防止冰晶形成是維持細(xì)胞活力的關(guān)鍵。大護(hù)法DMSO作為冷凍保護(hù)玻璃化劑,可以讓細(xì)胞免受冰晶導(dǎo)致的機(jī)械損傷。大護(hù)法法力無(wú)邊,能夠用于原代、繼代培養(yǎng)和重組的異倍體和雜交瘤細(xì)胞系、胚胎干細(xì)胞 (ESC) 以及造血干細(xì)胞的凍存。

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下面為大家解密DMSO這個(gè)既熟悉又陌生的細(xì)胞培養(yǎng)大護(hù)法~~

l? DMSO的摩爾濃度是多少?

DMSO的摩爾濃度為14.1 M,依據(jù)是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。

l? DMSO的來(lái)源?

過(guò)去,DMSO是從樹(shù)皮中分離出來(lái)的?,F(xiàn)在,它是一種商業(yè)合成的溶劑。

l? 細(xì)胞凍存培養(yǎng)基中應(yīng)使用什么濃度的DMSO?

DMSO通常以1-10%的濃度使用,具體取決于細(xì)胞系。

l? DMSO應(yīng)該是液體,為什么我收到后卻是固體?

DMSO的熔點(diǎn)為16-19℃,室溫過(guò)低就凝固。這并不妨礙使用,可以緩慢加熱令其重新液化,不會(huì)有任何影響。

l? 哪種類型的過(guò)濾器可用于無(wú)菌過(guò)濾DMSO?

DMSO可以用帶0.2 μm PTFE膜的過(guò)濾器進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。

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每個(gè)伺候細(xì)胞寶寶的“寶爸寶媽”對(duì)棕瓶子白蓋子的DMSO應(yīng)該都不陌生。沒(méi)錯(cuò)!正是Sigma-Aldrich?品牌熱賣的這款DMSO(貨號(hào):D2650):明星產(chǎn)品,質(zhì)量過(guò)硬,口碑積累,適用性廣,久經(jīng)驗(yàn)證。

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2.???? 二護(hù)法:血清

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血清里的生長(zhǎng)因子能促進(jìn)細(xì)胞的繁殖,附著因子可促進(jìn)細(xì)胞的貼壁,此外礦物質(zhì)、脂類及激素對(duì)細(xì)胞也大有裨益。常用的血清有胎牛血清和小牛血清,公認(rèn)澳洲來(lái)源的血清品質(zhì)更優(yōu)、更安全。

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趕快來(lái)了解一下保護(hù)細(xì)胞寶寶的二護(hù)法吧~~

l? 如何解凍血清?

血清應(yīng)在2-8°C過(guò)夜解凍以避免降解,或者在室溫條件下,定期輕輕搖動(dòng)使組分重懸。解凍的血清在加入細(xì)胞培養(yǎng)基前應(yīng)該混合均勻。反復(fù)凍存會(huì)嚴(yán)重影響血清品質(zhì),建議將解凍的血清分裝成單次使用量,并凍存于-20°C。如果儲(chǔ)存于2-8°C的環(huán)境中,應(yīng)該在2-4周內(nèi)盡快使用。溫度超過(guò)37°C時(shí)血清會(huì)降解,功能遭到破壞。

l? 如果血清收到時(shí)存在部分解凍,還能繼續(xù)使用嗎?

血清是干冰包裝運(yùn)輸,到達(dá)時(shí)應(yīng)該是冷凍狀態(tài)。運(yùn)輸超期,會(huì)部分解凍,但依然可以繼續(xù)使用。

l? 培養(yǎng)基中加入血清和所有補(bǔ)充物后可以儲(chǔ)存多久?

如果正確無(wú)菌操作,添加血清的培養(yǎng)基可以在2-8°C最長(zhǎng)儲(chǔ)存6周。不論儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)短,一旦培養(yǎng)基變渾濁,應(yīng)該使用適當(dāng)?shù)姆椒▉G棄。

l? 為什么血清會(huì)出現(xiàn)渾濁或絮狀物質(zhì)?

原因很多,主要有二:

1.? 反復(fù)的凍融會(huì)使血清脂蛋白發(fā)生變性造成渾濁,所以,一定要分裝哦~~

2.? 血清加工中遺留的纖維蛋白原在解凍時(shí)會(huì)轉(zhuǎn)化成纖維蛋白,過(guò)量的纖維蛋白就呈現(xiàn)為絮狀物。不要著急,可以離心移除;不推薦過(guò)濾哦,因?yàn)槿菀锥隆?p>l? 什么是γ輻照的血清?

γ輻照的血清通過(guò)暴露于放射性60Co產(chǎn)生的25-40 kGy劑量的γ射線來(lái)滅活病毒和其他外來(lái)微生物(比如支原體)。γ輻照處理不影響血清的理化性質(zhì)或細(xì)胞培養(yǎng)性能。

l? 為什么有些血清是熱滅活的?如何熱滅活?

哺乳動(dòng)物血清中天然存在的補(bǔ)體蛋白參與細(xì)胞溶解事件、收縮平滑肌、從肥大細(xì)胞和血小板中釋放組胺和激活淋巴細(xì)胞和髓細(xì)胞。熱滅活破壞了血清中補(bǔ)體的活性,因此免疫學(xué)應(yīng)用,培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)推薦使用。

熱滅活方法是在56°C水浴中處理30分鐘,并每隔大約10分鐘旋轉(zhuǎn)一次瓶子。為了保持精確,可使用一個(gè)類似大小的瓶子作為對(duì)照,對(duì)照瓶?jī)?nèi)放入同等體積的水,并放置一個(gè)溫度計(jì),在溫度到達(dá)56°C時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)30分鐘。熱滅活過(guò)程必須小心控制,避免血清中支持細(xì)胞和組織繁殖的關(guān)鍵蛋白組分發(fā)生降解。

l? 胎牛血清的顏色和之前使用的批次不同,會(huì)影響血清使用效果嗎?

血清的顏色取決于血紅蛋白濃度,顏色差異不影響血清性能。

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說(shuō)了這么多,從哪里請(qǐng)到這尊神呢?當(dāng)然首選默克啦~~澳洲來(lái)源的牛血清,滿足培養(yǎng)細(xì)胞的不同需要!

貨號(hào)

產(chǎn)品描述

F8318-500ML

胎牛血清,澳大利亞來(lái)源,無(wú)菌,適合細(xì)胞培養(yǎng),適合雜交瘤細(xì)胞,500mL

F8687-500ML

胎牛血清,澳大利亞來(lái)源,γ輻照,無(wú)菌,適合細(xì)胞培養(yǎng),適合雜交瘤細(xì)胞,500mL

B7446-1000ML

小牛血清,澳大利亞來(lái)源,無(wú)菌,適合細(xì)胞培養(yǎng),適合雜交瘤細(xì)胞,1000mL

B7447-1000ML

小牛血清,澳大利亞來(lái)源,γ輻照,無(wú)菌,適合細(xì)胞培養(yǎng),適合雜交瘤細(xì)胞,1000mL

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3.???? 三護(hù)法:胰蛋白酶

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在細(xì)胞培養(yǎng)中,從組織上解離或從貼壁基質(zhì)上分離細(xì)胞的步驟很關(guān)鍵,一般使用胰蛋白酶。胰蛋白酶作用于賴氨酸或精氨酸的C末端,在37°C時(shí)具有最佳的效率,因此使用期前要預(yù)熱。當(dāng)然,高濃度的胰蛋白酶長(zhǎng)期孵育會(huì)去除細(xì)胞表面蛋白而損傷細(xì)胞,甚至殺死細(xì)胞??磥?lái),這個(gè)護(hù)法的脾氣可不好哦~~

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根據(jù)應(yīng)用和細(xì)胞類型的不同,胰蛋白酶的組分和濃度也不同。比如,粘附分子在鈣離子存在時(shí)決定細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)的相互作用,為了削弱折衷聯(lián)系,通常使用含EDTA的胰蛋白酶螯合二價(jià)陽(yáng)離子(Ca, Mg)(點(diǎn)擊這里,了解更多:T4049)。

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胰蛋白酶的主要來(lái)源是豬的胰臟,產(chǎn)品是凍干粉或溶液。為了避免動(dòng)物或微生物物質(zhì),現(xiàn)在也有技術(shù)可以在玉米中重組表達(dá)牛胰蛋白酶,厲害吧?(點(diǎn)擊這里,了解更多:T3449)。

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胰蛋白酶的使用濃度也很有講究。對(duì)于強(qiáng)貼壁細(xì)胞系,常使用0.25%-2.5%的胰蛋白酶。如果實(shí)驗(yàn)需要細(xì)胞表面蛋白完整,則應(yīng)降低使用濃度(0.05%胰蛋白酶)。

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4.???? 四護(hù)法:抗生素

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細(xì)菌寶寶的生存環(huán)境這么好,肯定有壞蛋覬覦,這就需要請(qǐng)出四護(hù)法——抗生素。

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常見(jiàn)的生物污染由細(xì)菌、真菌和支原體造成,部分由病毒、化學(xué)物和細(xì)胞交叉污染造成。抗生素可以控制細(xì)胞培養(yǎng)中的生物污染。靈活使用抗生素是控制污染的方法,但千萬(wàn)不要偷懶,還是要注意無(wú)菌操作哦~~

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青霉素對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和少數(shù)革蘭氏陰性菌有效,鏈霉素對(duì)革蘭氏陰性菌和少數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌有效,聯(lián)合使用青霉素和鏈霉素(簡(jiǎn)稱雙抗),就能有效控制細(xì)胞培養(yǎng)中大多數(shù)細(xì)菌的污染啦~~

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默克旗下有相當(dāng)靠譜的抗生素。Sigma-Aldrich?品牌熱賣的青鏈霉素溶液(貨號(hào)為V900929)不僅性能穩(wěn)定,超高性價(jià)比;而且還是即用型經(jīng)典配方(10KU青霉素和10mg鏈霉素/mL),直接以1:100比例添加到培養(yǎng)基中就全搞定!

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怎么樣?這四大護(hù)法,是不是各個(gè)身手不凡呀!有了他們,細(xì)胞寶寶就可以健康無(wú)憂啦~~

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友情提醒,11月起我們會(huì)推出四大護(hù)法優(yōu)惠組合套裝,敬請(qǐng)留意~

也歡迎大家在留言區(qū)分享自己培養(yǎng)細(xì)胞的心得體會(huì)~~我們會(huì)精選出五個(gè)有趣有料的留言,送上默克超可愛(ài)的萌娃家族盲盒一個(gè),共有5位幸運(yùn)兒,快來(lái)留言參與吧!

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留言截止時(shí)間:2020年10月30日12:00


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