APOD蛋白；載脂蛋白D(APOD)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Apolipoprotein D (APOD)

Apo-D

來源：原核表達(dá)

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)具體詳見說明書

片段與標(biāo)簽：N-terminal His Tag

物種來源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱，不同的物種。

性狀：凍干粉

表達(dá)系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 90%-98%（SDS-PAGE RP-HPLC）

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲(chǔ)存。

APOD蛋白；載脂蛋白D(APOD)重組蛋白操作步驟

1．用緩沖液A漂洗菌體細(xì)胞（10ml/g）, 離心6000g×15min，收集菌體細(xì)胞，重復(fù)此步驟，將菌體細(xì)胞再在緩沖液A中洗滌一次。

2．將漂洗過的菌體細(xì)胞懸浮于緩沖液B中，超聲破碎，鏡檢，破碎率高于95%，離心1500g×30min，收集包涵體沉淀。

3．將包涵體沉淀用緩沖液Ⅰ、緩沖液Ⅱ、緩沖液Ⅲ分別超聲洗滌一次，1500g 離心收集包涵體沉淀。

4．包涵體的溶解：用含高濃度脲素的緩沖液室溫放置30min，然后離心1500g×30min，留上清。將溶解后的蛋白質(zhì)適當(dāng)稀釋，磁力攪拌，透析過夜。

5．溶解后的包涵體蛋白可通過親和層析進(jìn)一步純化。

如果APOD蛋白；載脂蛋白D(APOD)重組蛋白沒有表達(dá)很有可能的原因有兩個(gè):

1.載體構(gòu)建錯(cuò)誤。 另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯(cuò)誤，從而表達(dá)不出來?？股乜剐?載體多次傳代，特性發(fā)生變化；

2.宿主菌選擇不當(dāng)。不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動(dòng)子的載體，必須選擇合適的宿主菌進(jìn)行表達(dá)。因此，當(dāng)你的蛋白沒有表達(dá)出來時(shí)，可以考慮更換宿主菌；

至于是否選擇rosetta菌株，我認(rèn)為倒不是最關(guān)鍵的：Rosetta的功能是補(bǔ)充6種稀有密碼子對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因，特別是真核基因在原核中的表達(dá)水平。Rosetta會(huì)提高表達(dá)水平，不會(huì)對(duì)蛋白的表達(dá)起有或無的影響。

另外，需要確定你所有試劑準(zhǔn)確無誤，我自己在早期實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，有的試劑是實(shí)驗(yàn)室傳下來的，有些是問別人借的，其中載體，宿主菌以及抗生素都出現(xiàn)過問題，你要確定你用的試劑來源和性質(zhì)沒有問題，這個(gè)非常關(guān)鍵。

多肽的融合表達(dá)純化服務(wù)：擅長(zhǎng)做多肽（小于10kDa）的融合表達(dá)純化，通過蛋白酶去除融合標(biāo)簽蛋白，最終獲得高純度的小肽，氨基酸序列與天然多肽一致。

蛋白原核的可溶表達(dá)純化：通過與融合標(biāo)簽融合表達(dá)，以及通過表達(dá)菌株及表達(dá)條件的優(yōu)化，使得目的APOD蛋白；載脂蛋白D(APOD)重組蛋白以可溶的形式表達(dá)，進(jìn)而放大純化。

包涵體變復(fù)性：原核表達(dá)優(yōu)化后仍然是包涵體，通過對(duì)包涵體的洗滌，去除大量的雜蛋白，用變性劑變性，對(duì)復(fù)性條件進(jìn)行優(yōu)化，獲得復(fù)性蛋白。