培養(yǎng)液pH值變化太快
可能原因
建議解決方法
1.CO2張力不對(duì)
按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)應(yīng)CO2濃度為5%到10%。
2.培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊
松開瓶蓋1/4圈。
3.NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足
改用不依賴CO2培養(yǎng)液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃。
4.培養(yǎng)液中鹽濃度不正確
在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液。
5.細(xì)菌、酵母或真菌污染
丟棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌。
培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因
建議解決方法
1. 培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2
檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2
2. 培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大
檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度
3. 細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷
取新人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的保存細(xì)胞種
4. 培養(yǎng)液滲透壓不正確
檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓。注意:大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞能耐受滲透壓為260– 350 mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。
5. 培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積
換入新鮮培養(yǎng)液
細(xì)胞影響因素
1.細(xì)胞的表面積與體積之比以及細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)體積之間的平衡:細(xì)胞通過(guò)它的表面不斷地與周圍環(huán)境或鄰近細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)交換,這么它就必須有足夠的表面積,否則它的代謝作用就很難進(jìn)行。但細(xì)胞的體積由于生長(zhǎng)而逐漸增大時(shí),表面積與體積的比例就會(huì)變得越來(lái)越小,物質(zhì)交換適應(yīng)不了細(xì)胞的需要,這可以引起細(xì)胞的分裂,以恢復(fù)適宜的比例。同樣的,細(xì)胞核中的遺傳信息指引和控制范圍有限,細(xì)胞核對(duì)太大范圍的細(xì)胞質(zhì)的調(diào)控作用就會(huì)相對(duì)減少。
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