FMO1蛋白;含黃素單加氧酶1(FMO1)重組蛋白
英文名稱:Recombinant Flavin Containing Monooxygenase 1 (FMO1)
Dimethylaniline oxidase 1; Fetal hepatic flavin-containing monooxygenase 1
來(lái)源:原核表達(dá)
宿主:E.coli
規(guī)格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
內(nèi)毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)具體詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
片段與標(biāo)簽:Ala2~Leu271 with N-terminal His Tag
物種來(lái)源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種)相同的名稱,不同的物種。
FMO1蛋白;含黃素單加氧酶1(FMO1)重組蛋白性狀:凍干粉
表達(dá)系統(tǒng): 大腸桿菌
產(chǎn)品純度: 95%-98%(SDS-PAGE RP-HPLC)
保存條件:如果樣品在2-4周內(nèi)使用,可以在4°C低溫儲(chǔ)存。
長(zhǎng)期儲(chǔ)存,建議添加載體蛋白(0.1%HSA或BSA),并儲(chǔ)存在-20~ -80°C。避免多次凍融。
FMO1蛋白;含黃素單加氧酶1(FMO1)重組蛋白
蛋白重組表達(dá)策略組合
重組蛋白的表達(dá)往往不像理論那樣一帆風(fēng)順,在實(shí)際的表達(dá)過(guò)程中有可能產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。在選擇一個(gè)的蛋白表達(dá)策略非常困難的情況下,那么采用看似笨拙的方法,有可能會(huì)成為一種意想不到的“成功捷徑”,比如項(xiàng)目要求構(gòu)建表達(dá)兩種重組蛋白時(shí),構(gòu)建6種不同的表達(dá)質(zhì)粒,意味著有36種不同的表達(dá)條件組合,通過(guò)高通量微量蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)一次性就可獲得蛋白表達(dá)條件組合,后續(xù)中式飛行試驗(yàn)和成本控制會(huì)變得相對(duì)容易。
蛋白原核重組表達(dá)服務(wù)具體流程
FMO1蛋白;含黃素單加氧酶1(FMO1)重組蛋白融合標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測(cè)和鑒定
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
FMO1蛋白;含黃素單加氧酶1(FMO1)重組蛋白表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒(méi)太大的問(wèn)題。
雖然,在大腸桿菌中表達(dá)的蛋白由于缺少高級(jí)修飾和糖基化、磷酸化等翻譯后加工,常形成包涵體而影響表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性及構(gòu)象等缺點(diǎn),但原核表達(dá)具有的操作簡(jiǎn)單、快捷,需時(shí)較短,表達(dá)產(chǎn)量高,適合工業(yè)化等優(yōu)點(diǎn),仍是我們合成外源蛋白的選擇。原核表達(dá)的全過(guò)程有許多不確定因素,所以每完成一步都得檢驗(yàn)結(jié)果是否正確,當(dāng)實(shí)驗(yàn)遇到困難時(shí)如何進(jìn)行分析,找到問(wèn)題的癥結(jié)是我們實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。