TDO蛋白;色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白
英文名稱:Recombinant Tryptophan-2,3-dioxygenase (TDO)
TDO2; TPH2; TO; TRPO; Tryptophanase; Tryptophan oxygenase
來(lái)源:原核表達(dá)
宿主:E.coli
規(guī)格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
內(nèi)毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)具體詳見說(shuō)明書
片段與標(biāo)簽:Met1~Asp406 with N-terminal His Tag
物種來(lái)源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種)相同的名稱,不同的物種。
性狀:凍干粉
表達(dá)系統(tǒng): 大腸桿菌
產(chǎn)品純度: 90%-98%(SDS-PAGE & RP-HPLC)
保存條件:如果樣品在2-4周內(nèi)使用,可以在4°C低溫儲(chǔ)存。
TDO蛋白;色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白長(zhǎng)期儲(chǔ)存,建議添加載體蛋白(0.1%HSA或BSA),并儲(chǔ)存在-20~ -80°C。避免多次凍融。
影響蛋白原核表達(dá)的因素很多,如蛋白的親水性、密碼子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性過(guò)強(qiáng),就難以表達(dá);稀有密碼子過(guò)多或多個(gè)稀有密碼子連在一起也難以表達(dá)。我以前也遇到過(guò)這種情況,首先要分析你的蛋白序列和二級(jí)結(jié)構(gòu),看看是否存在這些影響因素。如果必須要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白,像你這種情況難度就比較大,可以進(jìn)行密碼子的改造,或者更換載體,或者更換宿主菌??茨阍囼?yàn)的目的,如果不需要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白,如表達(dá)部分抗原性強(qiáng)的片段,可以簡(jiǎn)單一點(diǎn),表達(dá)部分片段即可。
TDO蛋白;色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白原核表達(dá)秘笈:表達(dá)前的分析比什么都重要:
表達(dá)不同于其它一些實(shí)驗(yàn),比如:提取質(zhì)粒、PCR、電鏡切片,這些人為控制的因素比較多,出問題相對(duì)來(lái)說(shuō)也比較好分析。表達(dá)呢,你把質(zhì)粒克隆好啦,交給細(xì)胞,然后有些事情就不全是你要怎樣就怎樣了。原核表達(dá)在表達(dá)當(dāng)中來(lái)說(shuō)還是比較簡(jiǎn)單,細(xì)菌培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)速度快,需要的儀器和培養(yǎng)基都比較便宜。當(dāng)然,它也存在一些缺乏高級(jí)修飾、細(xì)胞內(nèi)部還原性過(guò)高等缺點(diǎn)。
原核表達(dá)從一開始的設(shè)計(jì)就非常重要,所謂好的開始是成功的一半。做足準(zhǔn)備功夫,可是省去很多將來(lái)后悔的事情。首先,我們要根據(jù)是否要求可溶將載體分成兩大類,如果希望可以同時(shí)嘗試多種表達(dá)系統(tǒng),也有許多商業(yè)化的系統(tǒng)供選擇。
前面已經(jīng)介紹過(guò)許多公司的商業(yè)化載體、菌株和多系統(tǒng)表達(dá)體系,現(xiàn)在我想先從自己的蛋白分析講起。同樣的載體、同樣的系統(tǒng),很可能表達(dá)這個(gè)蛋白表達(dá)量奇高,但是另外一個(gè)就是做不出來(lái),所以沒有全能的載體,只有永恒的分析。當(dāng)然如果你的蛋白曾經(jīng)在原核系統(tǒng)中成功表達(dá)出來(lái)那是好的,TDO蛋白;色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白選擇同樣的載體表達(dá)成功率會(huì)高很多。如果沒有也好嘗試找一些曾經(jīng)表達(dá)過(guò)和你的蛋白擁有相類似結(jié)構(gòu)的文獻(xiàn)。比如大部分含有哺乳動(dòng)物src同源的SH2蛋白相互作用域的蛋白都是用pGEX系列載體表達(dá)出來(lái)的。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)而言,含有較少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小為60kD的單體蛋白較容易表達(dá)。
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