TDO蛋白；色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Tryptophan-2,3-dioxygenase (TDO)

TDO2; TPH2; TO; TRPO; Tryptophanase; Tryptophan oxygenase

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)具體詳見說(shuō)明書

片段與標(biāo)簽：Met1~Asp406 with N-terminal His Tag

物種來(lái)源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱，不同的物種。

性狀：凍干粉

表達(dá)系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 90%-98%（SDS-PAGE & RP-HPLC）

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲(chǔ)存。 

TDO蛋白；色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白長(zhǎng)期儲(chǔ)存，建議添加載體蛋白（0.1％HSA或BSA），并儲(chǔ)存在-20~ -80°C。避免多次凍融。

影響蛋白原核表達(dá)的因素很多，如蛋白的親水性、密碼子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性過(guò)強(qiáng)，就難以表達(dá)；稀有密碼子過(guò)多或多個(gè)稀有密碼子連在一起也難以表達(dá)。我以前也遇到過(guò)這種情況，首先要分析你的蛋白序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)，看看是否存在這些影響因素。如果必須要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白，像你這種情況難度就比較大，可以進(jìn)行密碼子的改造，或者更換載體，或者更換宿主菌?？茨阍囼?yàn)的目的，如果不需要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白，如表達(dá)部分抗原性強(qiáng)的片段，可以簡(jiǎn)單一點(diǎn)，表達(dá)部分片段即可。

TDO蛋白；色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白原核表達(dá)秘笈：表達(dá)前的分析比什么都重要：

表達(dá)不同于其它一些實(shí)驗(yàn)，比如：提取質(zhì)粒、PCR、電鏡切片，這些人為控制的因素比較多，出問題相對(duì)來(lái)說(shuō)也比較好分析。表達(dá)呢，你把質(zhì)粒克隆好啦，交給細(xì)胞，然后有些事情就不全是你要怎樣就怎樣了。原核表達(dá)在表達(dá)當(dāng)中來(lái)說(shuō)還是比較簡(jiǎn)單，細(xì)菌培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)速度快，需要的儀器和培養(yǎng)基都比較便宜。當(dāng)然，它也存在一些缺乏高級(jí)修飾、細(xì)胞內(nèi)部還原性過(guò)高等缺點(diǎn)。

原核表達(dá)從一開始的設(shè)計(jì)就非常重要，所謂好的開始是成功的一半。做足準(zhǔn)備功夫，可是省去很多將來(lái)后悔的事情。首先，我們要根據(jù)是否要求可溶將載體分成兩大類，如果希望可以同時(shí)嘗試多種表達(dá)系統(tǒng)，也有許多商業(yè)化的系統(tǒng)供選擇。

前面已經(jīng)介紹過(guò)許多公司的商業(yè)化載體、菌株和多系統(tǒng)表達(dá)體系，現(xiàn)在我想先從自己的蛋白分析講起。同樣的載體、同樣的系統(tǒng)，很可能表達(dá)這個(gè)蛋白表達(dá)量奇高，但是另外一個(gè)就是做不出來(lái)，所以沒有全能的載體，只有永恒的分析。當(dāng)然如果你的蛋白曾經(jīng)在原核系統(tǒng)中成功表達(dá)出來(lái)那是好的，TDO蛋白；色氨酸-2,3-雙加氧酶(TDO)重組蛋白選擇同樣的載體表達(dá)成功率會(huì)高很多。如果沒有也好嘗試找一些曾經(jīng)表達(dá)過(guò)和你的蛋白擁有相類似結(jié)構(gòu)的文獻(xiàn)。比如大部分含有哺乳動(dòng)物src同源的SH2蛋白相互作用域的蛋白都是用pGEX系列載體表達(dá)出來(lái)的。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)而言，含有較少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小為60kD的單體蛋白較容易表達(dá)。

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