HGF蛋白;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)重組蛋白
英文名稱:Recombinant Hepatocyte Growth Factor (HGF)
HGF; F-TCF; HGFB; HPTA; SF; Scatter Factor; Hepapoietin A; Fibroblast-Derived Tumor Cytotoxic Factor; Lung Fibroblast-Derived Mitogen
來(lái)源:原核表達(dá)
宿主:E.coli
規(guī)格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
內(nèi)毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)具體詳見說(shuō)明書
片段與標(biāo)簽:Val495~Ser730 with N-terminal His Tag
物種來(lái)源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種)相同的名稱,不同的物種。
HGF蛋白;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)重組蛋白性狀:凍干粉
表達(dá)系統(tǒng): 大腸桿菌
產(chǎn)品純度: 95%-98%(SDS-PAGE & RP-HPLC)
保存條件:如果樣品在2-4周內(nèi)使用,可以在4°C低溫儲(chǔ)存。
長(zhǎng)期儲(chǔ)存,建議添加載體蛋白(0.1%HSA或BSA),并儲(chǔ)存在-20~ -80°C。避免多次凍融。
HGF蛋白;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)重組蛋白的分泌表達(dá)優(yōu)點(diǎn):
1、一些可被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶所降解的蛋白質(zhì)分泌到周質(zhì)或培養(yǎng)基中可增加其穩(wěn)定性;
2、有些在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)無(wú)活性的蛋白分泌表達(dá)時(shí)能夠按適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行準(zhǔn)確折疊,增加到蛋白的活性;
3、 由于蛋白質(zhì)信號(hào)肽和編碼序列間被切割,所以分泌蛋白產(chǎn)物不含氨基酸起始密碼子 ATG 所編碼的甲硫氨酸,而甲硫氨酸會(huì)影響許多蛋白的活性。
HGF蛋白;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)重組蛋白和天然蛋白有什么區(qū)別:
蛋白質(zhì)重組,先要全部水解為氨基酸,蛋白質(zhì)的種類多就是因?yàn)樗臄?shù)量大,結(jié)構(gòu)復(fù)雜,空間結(jié)構(gòu)千變?nèi)f化。而基本的氨基酸只有20中,所以它重組以后就可能變成完全不同的東西,控制和以前完全無(wú)關(guān)的代謝過(guò)程。
基因重組只是控制同一性狀表達(dá)不同而已,但是它不會(huì)改變性狀的基本情況。如:控制眼睛顏色的基因,親本的基因重組之后可能親本為黑色,子代便為藍(lán)色。但不會(huì)控制眼睛顏色的基因在重組之后就變成控制耳朵的基因。
HGF蛋白;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在 -80℃ 條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過(guò)程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。
(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。Immune tech 大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過(guò)濾后的無(wú)菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白 100μg,用 86μl 的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可完全溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子,對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來(lái)保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲(chǔ)存過(guò)程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加 8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過(guò)程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,甘露醇也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。
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