近兩天， 一則關(guān)于“果凍，老酸奶是由破皮鞋做成的”消息在網(wǎng)上瘋傳，因破皮鞋可以提煉出明膠。明膠是一種極為常見的食品添加劑，是從牛、豬等動(dòng)物骨和皮中的膠原通過(guò)變性而制得的變性蛋白質(zhì)，其化學(xué)組成與膠原基本相同，主要成分是膠原蛋白。老酸奶等乳制品為了保持其口感和外觀，會(huì)適當(dāng)添加明膠等食品添加劑，這是國(guó)家允許使用的。而皮革制成的明膠透明，無(wú)味，消費(fèi)者根本無(wú)法將正規(guī)的食用明膠和皮革制成的明膠區(qū)分開來(lái)。
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如何區(qū)分老酸奶等乳制品中添加的是食用明膠還是皮革廢料提煉出來(lái)的工業(yè)明膠，這一難題一直困擾著廣大分析工作者。迪馬科技獨(dú)辟蹊徑，探索是否可以通過(guò)檢測(cè)皮革水解蛋白來(lái)確認(rèn)老酸奶等乳制品中明膠的來(lái)源。皮革水解蛋白是皮革廢料或動(dòng)物皮毛、臟器等水解生成的一種蛋白粉，對(duì)于乳與乳制品中皮革水解蛋白的鑒定，主要是通過(guò)對(duì)L-羥脯氨酸含量的測(cè)定。L-羥脯氨酸是膠原蛋白（皮革水解蛋白）特有的氨基酸，在乳酷蛋白中則沒(méi)有，所以一旦檢出，則可認(rèn)為可能含有皮革水解蛋白，即可判斷該乳制品中有可能含有由廢棄皮革而來(lái)的成分。
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迪馬科技實(shí)驗(yàn)室開發(fā)了兩種L-羥脯氨酸衍生方法，利用氨基酸分析柱，對(duì)L-羥脯氨酸進(jìn)行分析檢測(cè)。該方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，方法穩(wěn)定性好，可用于老酸奶等奶制品中是否含有皮革成分的鑒別，兩種衍生化方法，方便您根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇。
以下是老酸奶中L-羥脯氨酸的測(cè)定的詳細(xì)檢測(cè)方法：
?老酸奶中L-羥脯氨酸的HPLC測(cè)定
1 儀器與試劑
1.1 儀器、器皿
1.1.1 HPLC+紫外檢測(cè)器
1.1.2 Diamonsil AAA氨基酸分析柱
1.1.3 11 mL水解瓶
1.1.4 1.5 mL塑料離心管
1.1.5 20 mL玻璃具塞刻度試管
1.1.6 5 mL玻璃具塞刻度試管
1.1.7 0.22 μm針頭式過(guò)濾器
1.1.8 2 mL樣品瓶
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1.2 試劑
1.2.1 甲醇
1.2.2 乙腈
1.2.3 正己烷
1.2.3 三乙胺
1.2.4 冰醋酸
1.2.5 磷酸氫二鈉
1.2.6 磷酸二氫鈉
1.2.7 L-羥脯氨酸
1.2.8 蛋白水解試劑：稱取0.1 g苯酚置于100 mL容量瓶，加入50 mL濃鹽酸（36%-38%，摩爾濃度約為12 mol/L），然后加水定容至100 mL。
1.2.9 ?0.1 mol/L HCl水溶液：量取8.3 mL濃鹽酸，然后用純水定容至1000 mL。
1.2.10 衍生劑PITC溶液：將250 μL異硫氰酸苯酯（PITC）用乙腈定容至10 mL。
1.2.11 三乙胺溶液：將1.4 mL三乙胺用乙腈定容至10 mL。
1.2.12 衍生劑DNFB溶液：0.5 mL 2,4-二硝基氟苯（DNFB）溶于50 mL乙腈。
1.2.13 Na2B4O7緩沖溶液：稱取1.91 g Na2B4O7·10 H2O，用50 mL純水溶解。
1.2.14 氨基酸儲(chǔ)備液：稱取一定量L-羥脯氨酸，用0.1 mol/L HCl水溶液溶解，得到濃度為? 0.05 mol/L的儲(chǔ)備溶液。
1.2.15 氨基酸使用液：將儲(chǔ)備液用0.1 mol/L HCl水溶液稀釋，得到濃度為0.0003 mol/L的L-羥脯氨酸溶液。
1.2.16 磷酸鹽緩沖溶液：0.02 mol/L Na2HPO4 和NaH2PO4水溶液。
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 樣品水解